Contribution à l'étude de virus de mollusques marins apparentés ...

Epuisement des anticorps
1 - Utiliser 200 à 250 mg de poudre acétonique par ml de sérum ou d'ascite à épuiser.
2 - Mélanger et incuber 30 minutes à 4°C.
3 - Centrifuger 10 minutes à 8000g à 4 oC.
4 - Conserver le surnageant, contenant le sérum ou l'ascite épuisée, à 4°C ou à -20°C.
5 - Méthodes de culture cellulaire
5.1 - Milieux de culture et réactifs
Milieux de culture et suppléments
Pénicilline-streptomycine
Pénicilline G 105U1ml
Streptomycine 100 mg/ml
Cette solution est conservée à -20°C.
Utiliser en diluant 1000 fois dans les milieux de culture.
Sérum de veau foetal (SVF)
1 - Décongeler le SVF (Gibco) au bain-marie à 37°C.
2 - Décomplémenter à 56°C, 30 minutes.
3 - Stocker des fractions aliquotes de 50 ml à -20°C.
Bouillon de tryptose phosphate (BTP)
Bouillon de tryptose phosphate (OSI), 29,5g11.
Autoclaver et stocker à 4 oC.
Le bouillon de tryptose phosphate commercialisé par OSI est préparé à partir de
bactotryptose (20 gll), bactodextrose (2 gll), chlorure de sodium (5 gll) et phosphate
disodique (2,5 gll) et est commercialisé Iyophylisé.
Milieu de Stoker
1 - Reconstituer le milieu minimum de Eagle, modification de Glasgow (Gibco) en
tampon Tris (20 mM ; pH 7,4).
2 - Stériliser par filtration sur membrane de 0,2 J.lm.
3 - Pour la culture des cellules de poissons, ce milieu est additionné d'antibiotiques
(pénicilline-streptomycine) et supplémenté par du SVF (10%) et du BTP (10%).
Milieu de Grace
1 - Le milieu de Grace (Gibco) est reconstitué selon les indications du fournisseur.
2 - Pour la culture des cellules d'insecte, ce milieu est additionné d'antibiotiques
(pénicilline-streptomycine) et supplémenté par du SVF (10%).
Solution de trypsine-yersène
NaCI
KCl
Na2HP04, 12H20
KH 2P0 4
Versène (EDTA disodique)
8 gll
0,2 gll
2,77 gli
0,2 gll
0,4 gll
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