Livro das Actas - advid

Livro Actas
3.2-Teste de sensibilidade dos primers
Para determinar o limite de sensibilidade de deteção do kit inocularam-se quantidades
conhecidas de células quer de leveduras quer de bactérias em amostras de mosto esterilizado,
por forma a obter mostos com concentrações crescentes de microrganismos, entre
25 e 25000 células/mL. O ADN total de cada mosto foi extraído e utilizado para deteção
da espécie inoculada por PCR. Em todas as condições testadas, obtiveram-se sempre
amplificações nos mostos inoculados com 25 células/mL, pelo que este foi considerado
como sendo o limite de deteção, demonstrando-se assim a extrema sensibilidade do
ENOKIT.
3.3-Validação do kit
Com o objetivo de validar o ENOKIT, recolheram-se várias amostras de mosto, vinho
e águas de lavagem, num total de 24 amostras, que foram posteriormente analisadas. O
produto resultante da amplificação foi visualizado por eletroforese. Na globalidade das
amostras foram detetados microrganismos pertencentes a 15 espécies nomeadamente,
A. aceti, G. oxydans, O. oeni, C. cantarelli, C. vanderwaltii, D. hansenii, H. uvarum, I.
terricola, M. pulcherrima, P. guilliermondii, P. membranifaciens, S. cerevisiae, T. delbrueckii,
Z. bailii e Z. bisporus.
Verificamos que o kit permite a deteção e identificação simultânea de diferentes espécies
presentes em amostras reais e, portanto, pode ser aplicado com sucesso na monitorização
da microflora vínica e deteção de microrganismos spoilage durante o processo de produção
de vinho.
3.4-Identificação e quantificação de brettanomyces/Dekkera bruxellensis e Zygosaccharomyces
spp.
O ENOKIT permite ainda uma quantificação de Brettanomyces/Dekkera bruxellensis
e Zygossacharomyces spp, obtida através de PCR quantitativo em tempo real. Na figura
2 apresenta-se o resultado da análise de um vinho quanto à presença de Zygosaccharomyces
e verificou-se que a amostra possui apenas ADN da levedura Zygosaccharomyces
rouxii.
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