Livro das Actas - advid

Livro Actas
en el ensayo IS. La primera levadura inoculada fue T. delbrueckii, y cuando
la densidad descendió 15 puntos se adicionó la segunda levadura de S. cerevisiae.
• Lalvin YSEO QA23® de Lallemand en los ensayos CT y MP
Fermentaciones
Las fermentaciones se realizaron por triplicado en depósitos de acero inoxidable de 100
L de capacidad con sistema de refrigeración por ducha de agua. Las levaduras comerciales
se inocularon siguiendo las instrucciones del fabricante. La temperatura se controló
a 17-18ºC y la evolución de las fermentaciones se siguió mediante las medidas
diarias de densidad y temperatura. Una vez finalizada la fermentación, el vino fue desliado,
sulfitado, y tras un proceso de clarificación y estabilización en frío, embotellado
y conservado hasta su posterior análisis químico y sensorial.
Control microbiológico
Se analizó la implantación de las levaduras inoculadas al final de las fermentaciones
para los ensayos de inoculación control (CT) e inoculación secuencial (IS). El método
utilizado fue el análisis del polimorfismo para la longitud de los fragmentos de restricción
del DNA mitocondrial. De las muestras tomadas del mosto al finalizar las fermentaciones
se hicieron diluciones y siembra en placa de medio YPD (1% extracto de levadura,
2% peptona, 2% glucosa y 2% agar) las cuales fueron incubadas durante 3-4 días
a 30 ºC. Después se seleccionaron al azar 15 aislamientos para su estudio por mtDNA-
RFLP. Cada aislamiento fue crecido en medio líquido YPD durante toda la noche, recogiendo
posteriormente el precipitado mediante centrifugación a 4000 rpm, 20 ºC. El
DNA fue purificado aplicando el método descrito por RODRÍGUEZ et al., 2011. Los
fragmentos de restricción fueron separados mediante electroforesis en gel de agarosa al
1% hechos con el tampón TBE 1X y 0,5 µg/mL de bromuro de etidio. La imagen de
cada gel fue digitalizada en el aparato Molecular Imager (Gel Doc XR) y analizados utilizando
el software Quantity One 1-D (Bio-Rad).
Determinaciones analíticas de los mostos y los vinos
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