Livro das Actas - advid

cadena de ADN se separan por calor, los cebadores se unen en lugares específicos de
cada hebra y a partir de ellos, la ADN polimerasa va catalizando la unión de los nucleótidos,
tomando como molde cada una de las hebras. El resultado son dos nuevas dobles
hebras de ADN.
La enzima ADN polimerasa que se utiliza suele ser la Taq polimerasa que permanece
estable a las altas temperaturas que se utilizan para desnaturalizar el ADN en cada ciclo
(hasta 95 ºC). Esta enzima fue aislada de la bacteria Thermus aquaticus.
Los productos de PCR pueden ser analizados mediante electroforesis en geles de agarosa,
o bien ser secuenciados, aumentando el poder de resolución de esta técnica en estudios
de caracterización molecular.
En hongos, y particularmente en levaduras, las secuencias de ADN que se han de amplificar
deben tener un alto grado de conservación, para evitar considerar los cambios en
el genoma debidos a mutaciones puntuales. Una de estas regiones altamente conservadas
es la que contiene los genes que codifican para el ARN ribosómico. De manera que la
técnica de PCR se utiliza para la identificación taxonómica de levaduras vínicas, amplificando
primero estas regiones junto con los espaciadores transcritos internos (ITS). Las
secuencias ITS, al ser más variables, se incluyen cuando se pretende distinguir entre
cepas relacionadas de una misma especie. Tras la amplificación por PCR se digiere el
producto con una enzima de restricción determinada (Guillamón et al. 1998; Esteve-
Zarzoso et al. 1999; Fernández-Espinar et al. 2000; Espinosa et al. 2002).
En algunos casos, estas técnicas también se han utilizado para determinar si los cultivos
de cepas de levaduras utilizados como iniciadores de las fermentaciones llegan a ser los
dominantes entre la población de levaduras durante el proceso de fermentación (Esteve-
Zarzoso et al., 2000; Raspor et al., 2002; Lopes et al., 2007; Rodríguez et al., 2010).
2. – ESTUDIO DE DINÁMICA DE POBLACIONES
En nuestro estudio hemos llevado a cabo una caracterización molecular de las levaduras
implicadas en las fermentaciones espontáneas de los vinos tintos biodinámicos en una
Bodega de Ribera del Duero (Valladolid). Aplicando la técnica molecular de Electroforesis
en Campo Pulsante, analizamos la diversidad de cepas de un total de siete depósitos
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