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Knie
AGA2012-229
Autologes konditioniertes Plasma verbessert Konstrukteigenschaften in Zusammenspiel mit
Fibroblasten aus dem vorderen Kreuzband
Autologous Conditioned Plasma improves construct characteristics in cooperation with
fibroblasts from the anterior cruciate ligament
Authors
* Patrick Prager Orthopädische Klinik, König-Ludwig-Haus Orthopädisches Zentrum für Muskuloskelettale
Forschung Universität Würzburg, Würzburg, Germany
Thomas Barthel Orthopädische Klinik, König-Ludwig-Haus Orthopädisches Zentrum für Muskuloskelettale
Forschung Universität Würzburg, Würzburg, Germany
Sascha Göbel Orthopädische Klinik, König-Ludwig-Haus Orthopädisches Zentrum für Muskuloskelettale
Forschung Universität Würzburg, Würzburg, Germany
Stephan Reppenhagen Orthopädische Klinik, König-Ludwig-Haus Orthopädisches Zentrum für Muskuloskelettale
Forschung Universität Würzburg, Würzburg, Germany
Andre Steinert Orthopädische Klinik, König-Ludwig-Haus Orthopädisches Zentrum für Muskuloskelettale
Forschung Universität Würzburg, Würzburg, Germany
Abstract
Fragstellung: Die Augmentierung der primären Naht des vorderen Kreuzbands (VKB) mit verschiedenen
Matrizes trägt zu einer verbesserten Heilung des VKB bei. Die hier vorgestellte in vitro Studie soll klären, in
welchen Mengen autologes konditioniertes Plasma (ACP TM, Fa. Arthrex) zellbesiedelten Kollagen Typ I-Hydrogelen
zugesetzt werden muss, um ein für die VKB-Rekonstruktion günstiges Mileu zu schaffen und welche Zellquellen
sich am besten für dieses Vorhaben eignen.
Methodik: Mesenchymale Stammzellen aus dem Knochenmark (BMSC) humaner sowie porciner Donoren
wurden durch Direktaussaat gewonnen. Die Isolierung humaner bzw. porciner Fibroblasten aus dem VKB erfolgte
nach Kollagenaseverdau. Die pH-induzierte Generierung augmentierter Gelkonstrukte wurde durch Vermengen
von je 150 µl Kollagen Typ I-Hydrogel mit 150 µl Neutralisationlösung (angereichert mit ACP und 300.000 Zellen
je Gel) eingeleitet. ACP wurde dem Konstrukt in 10-, 20- sowie 40%igem (v/v) Anteil am Gesamtvolumen
zugesetzt. Zusätzlich wurden ACP-freie Kontrollgruppen mit 10 % (v/v) fötalem Kälberserum (FCS) sowie ohne
FCS generiert. Eine reine ACP-Gruppe, welche durch thrombininduzierte Koagulation hergestellt wurde ebenfalls
untersucht. Die Kulturdauer betrug jeweils 21 Tage mit zusätzlichen Erntezeitpunkten nach 7 und 14 Tagen.
Neben der histologischen bzw. immunhistochemischen Charakterisierung erfolgte die Auswertung durch
proteinbiochemische Quantifizierung des DNA-Gehalts sowie der Aktivität an. An Tag 3 und 21 wurden außerdem
lebende bzw. apoptotische Zellen immunhistochemisch detektiert.
Ergebnis: Die untersuchten Gruppen zeigten hinsichtlich der Viabilität an Tag 3 und an Tag 21 vitale wie auch
wenige apoptotische Zellen, wobei keine Unterschiede zwischen den verwendeten ACP-Anteilen bzw. den
Zellquellen erkennbar waren. Der DNA-Gehalt wie auch die ATP-Aktivität zeigte in allen Konstrukten gleichdimensionerte
Werte. Ein Signifikanzniveau wurde nicht erreicht. Eine leichte Abnahme beider Parameter mit der
Zeit konnte in allen Gruppen ebenso beobachtet werden wie die Kondensation der Konstrukte mit zunehmender
Kulturdauer. Histologische Nachweise zeigten die gruppenunabhängige Inkorporation der Zellen in das
umliegende Kollagengerüst.
Schlussfolgerung: Augmentierte Kollagen Typ I-Hydrogele mit ACP und mesenchymalen Progenitorzellen
zeigen auch nach 21-tägiger Kulturzeit lebende in die sie umgebende Matrix eingeschlossene Zellen. Signifikante
Unterschiede zwischen dem ACP-Anteil oder den Donorzelltypen konnten bisher noch nicht festgestellt werden.
Weiterführende in vivo Untersuchungen sind geplant um die erhalten Daten im Tierversuch näher charakterisieren
bzw. eruieren zu können.
Keywords
ACL, MSC, ACP, PRP, hydrogel, construct
16.03.2012 196
Poster
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