2011 年底结题项目汇编 - 国家自然科学基金委员会医学科学部

医 学 科 学 部 六 处 专 项 基 金 科 学 部 主 任 基 金 H2607 卫 生 毒 理 274H2607 卫 生 毒 理构 建 红 、 绿 荧 光 蛋 白 双 信 号 发 光 酵 母 细 胞 高 通 量 筛 选 诱 变 原 的 研 究批 准 号 :81041111项 目 负 责 人 : 李 湘 鸣所 在 单 位 : 扬 州 大 学随 着 我 国 经 济 的 发 展 , 新 化 学 物 需 要 致 突 变 评 价 的 数 量 剧 增 , 但 现 行 的 致 突 变 实 验 远 不 能 满 足 需求 , 迫 切 需 要 发 展 高 通 量 方 法 。 因 此 , 建 立 快 速 、 高 通 量 的 评 价 方 法 , 对 保 护 人 民 健 康 有 十 分 重 要 的 战略 意 义 。 酵 母 是 低 等 真 核 细 胞 , 具 有 易 培 养 、 培 养 要 求 不 高 和 对 化 学 物 抵 抗 力 强 的 特 点 , 而 且 基 因 结构 、 调 控 、 代 谢 和 蛋 白 质 翻 译 后 加 工 与 哺 乳 动 物 细 胞 很 相 似 。 所 以 , 用 酵 母 作 为 宿 主 细 胞 , 用 于 筛 选化 学 诱 变 原 是 理 想 的 选 择 。 当 诱 变 原 作 用 酵 母 时 , 在 正 常 条 件 下 检 测 不 到 的 RNR3、RNR2、RAD54和 MAG1 会 表 达 。 可 用 分 子 生 物 学 技 术 , 将 RNR3、RNR2、RAD54 和 MAG1 启 动 子 与 酵 母 绿 色 荧 光 蛋白 (yEGFP) 相 串 联 , 构 建 成 受 诱 变 原 调 控 的 yEGFP 重 组 酵 母 , 并 发 现 RNR3、RNR2 和 RAD54 调 控的 酵 母 细 胞 发 光 度 与 多 数 诱 变 物 有 明 显 的 剂 量 - 效 应 关 系 。 但 yEGFP 发 光 受 细 胞 数 量 和 ― 状 态 ‖ 的 影响 , 需 用 细 胞 密 度 校 正 , 误 差 较 大 。 故 将 含 有 部 分 酵 母 嗜 好 密 码 子 的 红 色 荧 光 蛋 白 (DsRed), 重 组 于上 述 3 种 发 光 酵 母 , 作 为 ― 内 参 比 ‖, 但 经 仪 器 检 测 发 光 很 弱 , 无 法 反 映 细 胞 的 数 量 和 ― 状 态 ‖。 因 此 , 要 使DsRed 能 很 好 地 作 为 第 二 信 号 , 必 须 对 其 全 部 密 码 子 突 变 。关 键 词 : 诱 变 原 ; 荧 光 蛋 白 ; 致 突 变 评 价 ; 高 通 量学 科 代 码 :H2607获 奖 : 国 家 级 0 省 部 级 0 国 际 学 术 奖 0发 表 论 文 : 国 际 刊 物 0 国 内 核 心 刊 物 0 国 内 一 般 刊 物 0 SCI 收 录 0会 议 报 告 : 国 际 特 邀 0 分 组 0 国 内 特 邀 0 分 组 0培 养 人 才 : 博 士 后 0 博 士 0 硕 士 0 中 青 年 学 术 带 头 人 0学 术 交 流 : 举 办 国 际 会 议 0 举 办 国 内 会 议 0 出 国 参 加 国 际 会 议 0学 科 审 核 意 见 : 情 况 属 实NSFC 医 学 科 学 部 六 处 预 防 医 学 学 科2011 年 底 结 题 项 目 汇 编