Parasitosis regionales - Biblioteca central de la Universidad ...

Parasitosis regionales
Se trata de un diagnóstico directo donde se buscan fragmentos de ADN del parásito
en sangre. Es un método muy sensible y altamente específico.
La alta especificidad está lograda por la utilización de “primers” (fragmentos de ADN
complementarios al ADN del patógeno) compuestos por aproximadamente 20-25 nucleótidos,
los que deben estar avalados de manera tal que permitan la estandarización
internacional del método.
La reacción consiste básicamente en someter al ADN parasitario a ciclos de calentamiento
y enfriamiento, mediante los cuales se consiguen separar las dos hebras y al
ser monocatenarios permitir la unión de los primers complementarios. Luego, mediante
la utilización de una Polimerasa que actúa a altas temperaturas, se consigue
aumentar las copias de manera exponencial de manera que se evidencian, aún que
se encuentre tan solo un fragmento de ADN exógeno al hospedador.
9. TIFD (Test de inmunofluorescencia Directa): Con anticuerpos monoclonales.
MÉTODO DE CONCENTRACIÓN DE STRUT
El presente método se lo utiliza especialmente para el diagnóstico de las Tripanosomiosis.
El método clásico es el siguiente:
Se extrae sangre venosa (sin anticoagulante) y se centrifuga tres minutos a 160 G
(800 rpm). El sobrenadante se vuelve a centrifugar un minuto a 300-600 G (2000-
2500 rpm) durante 10 minutos, observándose al microscopio el sedimento de esta
segunda centrifugación. Con el suero extraído se pueden hacer reacciones indirectas.
Es una técnica muy utilizada por su sensibilidad.
Una variante a la técnica descripta sería el MICROSTROUT:
Este método consiste en la utilización de seis capilares heparinizados de microhematocritos,
los cuales se llenan de sangre del paciente. Una vez sellados los tubos por
uno de los extremos se centrifugan a 1000-1500 G durante 3 a 5 minutos. Después
de la centrifugación los tubos se mantienen en posición vertical. Luego, cada tubo se
corta entre el sobrenadante y el pellet de glóbulos rojos. El sobrenadante se coloca
entre porta y cubre y se observa al microscopio. Con un solo parásito hallado ya se
considera positiva la parasitemia. Otra manera de realizar este estudio es tomando
tubos Ephendorf a los cuales se les agrega 0,5 ml de sangre venosa y una gota de
heparina, luego se procede a la centrifugación a 3000 rpm por un lapso de 2 minutos.
Se realizan como mínimo cuatro preparados entre porta y cubre de la interfase entre
el suero y el paquete globular.
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