Parasitosis regionales - Biblioteca central de la Universidad ...

Sixto Raúl Costamagna y Elena C. Visciarelli (Compiladores)
B.1-ELISA para la determinación de antígenos
-ELISA Indirecto o «Sandwich». En este método al Ac monoclonal o policlonal
específico que se encuentra en fase sólida, luego del bloqueo de los sitios libres de
la placa y del lavado, se le añade la muestra que contiene los antígenos a investigar
y luego de un tiempo de incubación se adiciona un segundo anticuerpo específico
marcado con la enzima (conjugado). Por último, se añade el sustrato/cromógeno para
revelar la reacción. En estos casos la intensidad del color desarrollado es directamente
proporcional a la cantidad de Ag. Todos los pasos van precedidos de incubaciones
y lavados. Las soluciones de bloqueo más utilizadas son: la de leche descremada,
seroalbúmina bovina, gelatina, etc.
-ELISA Competitivo: El antígeno marcado con una enzima compite con el antígeno
presente en la muestra a analizar por una limitada cantidad de anticuerpos específicos.
La intensidad del color producto de la degradación enzimática del sustrato es
inversamente proporcional a la cantidad de antígeno en la muestra.
B.2-ELISA para determinación de anticuerpos
-ELISA Indirecto: es el método más utilizado para la determinación de anticuerpos.
Básicamente, consiste en la inmovilización de antígeno a la fase sólida, bloqueo de
sitios libres y la posterior adición del suero problema, finalizada la incubación y luego
de los lavados se agrega un segundo anticuerpo anti-inmunoglobulina marcado
con la enzima. Después de un nuevo lavado se añade el sustrato y cromógeno y se
determina la actividad enzimática. Este método se aplica en el diagnóstico de trichinellosis,
pudiéndose utilizar como antígenos extractos crudos o antígenos de excreción-secreción
de Trichinella spiralis, estos últimos brindan una mayor especificidad
de reacción, mientras que el uso de extractos crudos da lugar a falsos resultados. En
el diagnóstico de toxoplasmosis se utilizan antígenos de toxoplasmas obtenidos de
cultivo en peritoneo de ratón y diluciones del suero problema. Actualmente se dispone
de técnicas de ELISA para el diagnóstico de cisticercosis, toxocarosis, fasciolosis,
entre otros. El resultado positivo de la reacción se determina de acuerdo con el valor
de corte establecido para la población en estudio.
La presencia de anticuerpos de un isotipo determinado como podrá ser IgM o IgG se
puede demostrar utilizando anticuerpos anti-cadena H de gammaglobulinas, anti-m o
anti-g, conjugados a la enzima. La identificación de un isotipo u otro involucrado en
la respuesta al parásito es de importancia, en algunas parasitosis, cuando se desea
determinar una fase aguda de infección.
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