Programmreport 2012 - DORIS - Bundesamt für Strahlenschutz

Ergebnisse
TB 08
TUNEL-Assay ebenfalls bestimmt. Des Weiteren wurde ein Einfluss auf die Zellzyklusverteilung in durchflusszytometrischen
Zellzyklusanalysen sowie durch Bestimmung des Proliferationsindex CBPI (cytokinesis block
proliferation index)im Mikrokerntest überprüft. Insgesamt wurden in diesem Projekt 23 Probanden rekrutiert
und die Zellen von 20 Probanden aus Biopsien isoliert, befeldet und analysiert.
4.2 STATISTISCHE ANALYSEN
Für die Ergebnisse der Analysen des Comet-Assays, der Mikrokerntests, des TUNEL-Assays und der Zellzyklusanalysen
sowie für die verschiedenen Befeldungszeiten wurden Permutationstests und Sensitivitätsanalysen
für die Altersgruppen gemeinsam, wie auch im Zuge einer detaillierten Betrachtung zusätzlich nach den
beiden Alterskollektiven, juvenil (18-19 Jahre) und adult (50-59 Jahre), getrennt untersucht.
4.3 PROBLEME BEI DER DURCHFÜHRUNG
Die Durchführung des Projektes selbst unterlag einigen Problemen, die auch mit den Vorgaben durch die RE-
FLEX-Studie zusammenhingen und schlussendlich zu einer deutlichen Verzögerung geführt haben. Zum einen
wurde der Zeitplan auf Grund wiederholter größerer Ausfälle der Befeldungsapparatur dramatisch verzögert,
da angezogene Kulturen dann nur teilbefeldet wurden und daher verworfen werden mussten. Es zeigte
sich zum anderen, dass die durch die REFLEX-Studie bedingte Verwendung von primären Fibroblasten auf
Grund der niedrigen Teilungsaktivität der Zellen nur bedingt für diese Art Untersuchungen geeignet ist.
5. ERGEBNISSE
Mit den erhoben Rohdaten der untersuchten Endpunkte (Comet-Assay mit und ohne Fpg-Verdau, Mikrokerntest
mit CREST-Markierung, numerische Chromosomenaberrationen, TUNEL-Assay und Zellzyklus) wurden
statistische Analysen in Hinblick auf einen Dosistrend sowie die dazu gehörigen Sensitivitätsanalysen durchgeführt.
Weiterhin wurden in der Dosistrendanalyse die Differenzen zur scheinexponierten Kontrolle untersucht.
Exemplarisch sind im nachfolgenden für einige Endpunkte die graphische Darstellung der Mittelwertsdifferenzen
des gesamten Kollektivs im Vergleich zur Scheinexposition (Sham) sowie die Assay-spezifische
Positivkontrolle dargestellt.
Die statistischen Analysen zeigten für keinen der in diesem Projekt untersuchten Endpunkte statistisch signifikante
Einflüsse durch die EMF-Befeldung mit SAR-Werten von 0,2, 2 und 10 W/kg. Auch eine getrennte Betrachtung
der beiden untersuchten Alterskollektive (juvenil: 18-19 Jahre, adult: 50-59 Jahre) zeigte keinen statistisch
signifikanten Einfluss durch die EMF-Befeldung.
5.1 COMET-ASSAY
Mittels des alkalischen Comet-Assays wurde die Induktion von DNA-Schäden in Abhängigkeit vom SAR-Wert
untersucht. Als analytische Endpunkte wurden die logarithmierten Werte des DNA-Gehalts im Kopf sowie des
Olive-Tail-Moments festgelegt.
Exemplarisch ist in Abbildung 1 die graphische Darstellung der Mittelwertsdifferenzen des gesamten Kollektivs
für den logarithmierten Wert des DNA-Gehaltes im Kopf (sprich Zellkern) im Vergleich zur Sham, sowie die Assay-spezifische
Positivkontrolle dargestellt. Es zeigen sich im Hinblick auf induzierte DNA-Strangbrüche keine
statistisch signifikanten Unterschiede zwischen exponierten Proben und scheinexponierten Kontrollen.
5.2 COMET-ASSAY MIT Fpg-INKUBATION
Mittels des Comet-Assays mit Inkubation mit dem Fpg-Enzym wurde die Induktion von oxidativen DNA-Schäden
in Abhängigkeit vom SAR-Wert untersucht. Als analytische Endpunkte wurden auch hier die logarithmierten
Werte des DNA-Gehalts im Kopf sowie des Olive-Tail-Moments festgelegt.
Exemplarisch ist in Abbildung 2 die graphische Darstellung der Mittelwertsdifferenzen des gesamten Kollektivs
für den logarithmierten Wert des DNA-Gehaltes im Kopf im Vergleich zur Sham, sowie die Assay-spezifische
Positivkontrolle dargestellt. Zu beachten ist, dass die Positivkontrollsubstanz, welche spezifisch oxidative
Schäden hervorruft, dementsprechend nur unter Einwirkung des Fpg-Enzyms einen Effekt zeigt.
Es zeigen im sich im Hinblick auf die Induktion oxidativer DNA-Schäden keine statistisch signifikanten Unterschiede
zwischen exponierten Proben und scheinexponierten Kontrollen.
96 Ergebnisse der abgeschlossenen Forschungsvorhaben im Jahr 2012 - TB 08