Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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9.5 Methodenbeschreibung der PCR-Analyse aus dem Institut für
Lebensmittelqualität und -sicherheit
Die Beschreibung der Methode zur PCR-Analyse wurde vom Institut für
Lebensmittelqualität und –sicherheit der Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover
zur Verfügung gestellt.
Probenanreicherung modifiziert nach Jansen
• Stomacherbeutel Gewebeeinlage für den Circulator 400
• Steriles Besteck (Scheren, Pinzetten)
• Einmalskalpelle
• 99 % verg. Alkohol zum Abflammen in einem Becherglas
• Bunsenbrenner
• Sterile Teller
• Sterile Petrischalen
• Papiertuch
• 15 und 50 ml Zentrifugenröhrchen
• Transferpipetten
• ev. Alufolie
Lösungen:
• 50 mM Na-Phosphat-Puffer, pH 7
• RCM supp = RCM+ Zusammensetzung siehe Anhang
Vorbereitung:
• Wasserbad auf 60 o C vorheizen
Probenaufarbeitung:
Trockenes Probenmaterial (z.B. Futtermittel):
25 g Material mit 50 ml Na-Phosphat-Puffer in einen Stomacherbeutel füllen. Sollte
der Puffer nach dem Stomachern vollständig aufgesaugt sein, wird die Probe weiter
mit Puffer verdünnt.
Nächste Verdünnung: 50 ml Na-Phosphat-Puffer zur Probe geben und erneut
stomachern (1min)
Organe:
25 g des Organs mit 50 ml Na-Phosphat-Puffer in einen Stomacherbeutel füllen,
Organe mit Skalpell und Schere in erbsgroße Stücke zerkleinern.
Darm-Trakt:
25 g des Darm-Traktes mit Schere und Skalpell aufschneiden und mit 50 ml Na-
Phosphat-Puffer in einen Stomacherbeutel füllen