Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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DNAX + BoNT C1 positiv, BoNT C2 negativ = Cl. Bot Typ C nachgewiesen (bei
schwachen Produkten: Kontrolle der PCR-Produkte durch Restriktion, bzw Kontroll-
PCR für BoNT C1 mit Tox C-Primern.
BoNT C1 positiv, DNAX + BoNT C2 negativ = Kontrolle der PCR-Produkte durch
Restriktion, bzw Kontroll-PCR für BoNT C1 mit Tox C-Primern.
In der Regel machen wir auch einen allgemeinen Nachweis von Cl. perf mit, da
dieser in der Kultur auch Gas bildet und einen Clostridentypischen Geruch hat.
Eventuell unterdrückt er auch das Wachstum von Cl. botulinum Typ C+D ( bisher
haben wir nur einmal beide in der Anreicherung nachgewiesen).
Bei allen Restriktionen sollte man im Kopf haben, dass sich die Sequenzen der
einzelnen Clostridienklone voneinander unterscheiden. Wir haben von ca. 22
sequenzierten Proben keine Übereinstimmung mit unserem Vergleichsstamm CCUG
7970 gefunden. Es gab 4 verschiedene Klone.
BoNT A: Bot A F/R 283 bp
Nachweis von BoNT A, B, E und F
BoNT B: CMBL 1+2 205 bp
Lindström et al., Appl. Env. Microbiol. 67, 5694-5699
BoNT E: CMBL 1+2 389 bp
Lindström et al., Appl. Env. Microbiol. 67, 5694-5699
BoNT F: Bot F F/R 332 bp
Nachweis von BoNT D:
Primer der 1. PCR: Bot D F/R 497 bp
Primer der 2. PCR: Bot D Fi/Ri 176 bp U. Peters