Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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PCR-Bedingungen
Nachweis von 16S, DNAX, 2. PCR, BoNT-C1+2, D, cpa (allgemeines Cl. perf.
Toxingen)
25 µl Ansatz:
Ausgangskonzentration pro Ansatz (25µl), Rest
H2O
Endkonzentration
10x PCR-Puffer
(Invitrogen)
2,5 1 fach
je 5 µM Primer F/R 2,5 je 0,4,µM
50 mM MgCl2 1,0 2 mM
je 10 mM dNTPs 0,5 je 0,2 mM
5 U/µl Taq (Invitrogen) 0,2 1 U
23 µl PCR-Mix und 2 µl DNA bzw. PCR-Produkt der 1. PCR oder H20
Nachweis von DNAX 1. PCR
25 µl Ansatz:
Ausgangskonzentration pro Ansatz (25µl), Rest
H2O
Endkonzentration
10x PCR-Puffer
(Invitrogen)
2,5 1 fach
je 5 µM Primer F/R 2,5 je 0,4,µM
50 mM MgCl2 1,5 3 mM
je 10 mM dNTPs 0,5 je 0,2 mM
5 U/µl Taq (Invitrogen) 0,2 1 U
23 µl PCR-Mix und 2 µl DNA bzw. PCR-Produkt der 1. PCR oder H20
Nachweis von BoNT A,B, E,F
Ausgangskonzentration pro Ansatz (25µl), Rest
H2O
Endkonzentration
10x PCR-Puffer
(Invitrogen)
2,5 1 fach
je 10 µM Primer F/R 2,5 je 0,4,µM
50 mM MgCl2 0,75 1,5 mM
je 10 mM dNTPs 0,5 je 0,2 mM
5 U/µl Taq (Invitrogen) 0,2 1 U
20 µl Mix pro Reaktion + 5 µl DNA / H2O