Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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- 36 - Tab. 3.7: Farbstoffe im Vorversuch zur Etablierung eines Vitalfarbstoffs für ruminale Protozoen Name Konzentration (%) Firma Art.- Nummer Konzentration (%) in der Pansensaftprobe Brillantkresylblau 0,5 Merck ® 1280 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Eosinlösung 1 Merck ® 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Fuchsin - Fluka ® 87794 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Gentianaviolett - Merck ® 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Giemsa - Merck ® 9204 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Hämatoxylin 0,5 Riedel-de 33230 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Haën ® Janusgrün 1 Merck ® 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Kongorot 0,5 Sigma ® 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Malachitgrün 0,5 Merck ® 1310 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Trypanblau 0,5 Merck ® 11732 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Methylenblau - Riedel-de 28514 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Haën ® Methylenblau nach Löffler 0,5 Merck ® 1287 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Methylgrün 0,5 Certistain ® 15944 0,4; 0,6; 1,2; 1,6 Pro Farbstoff gab es vier Versuchsansätze mit unterschiedlichen Konzentrationen (siehe Tab. 3.7). Zunächst wurden Zentrifugenröhrchen im 39 °C-Wasserbad vorgeheizt und mit einem Deckel versehen, um ein Absetzen von Kondenswasser aus dem Wasserbad in den Röhrchen zu verhindern. Erst nach dem Erwärmen wurde eine frische Pansensaftprobe aus dem fistulierten Tier entnommen und durch eine doppelte Lage Mullbinde geseiht. In jedes Röhrchen wurden anschließend 5 mL Pansensaft gefüllt, mit der entsprechenden Menge vorgewärmten Farbstoffes versetzt und im Wasserbad für zwei Stunden gelagert. Nach der Lagerung erfolgte die Zentrifugation der Proben mit 28.000 xg für 10 Minuten bei RT. Der Überstand wurde bis auf 400 µL verworfen. 20 µL des Rückstandes wurden auf einen Objektträger gegeben und mit einem Deckgläschen abgedeckt. Anschließend wurden die verschiedenen Versuchsansätze bei 200facher Vergrößerung durchgemustert. Dabei wurde beurteilt welche Protozoengattungen sich färbten, bei welcher Konzentration eine Färbung erfolgte und ob irgendwelche Umstände wie zum Beispiel freier Farbstoff die Beurteilung erschwerte (s. Tab. 3.8).
- 37 - Tab. 3.8: Ergebnisse der Vorversuche zur Findung einer Vitalfärbung für Protozoen – Zugabe des Farbstoffs ohne Zusatz von Stärke oder Hefe Farbstoff Farbstoffmenge (%) Gefärbte Arten Ergebnis Kongorot 0,4 Diplodinium, nicht alle Protozoen sind Entodinium gefärbt Kongorot 0,8 Diplodinium, nicht alle Protozoen sind Entodinium gefärbt Kongorot 1,2 Diplodinium, Entodinium viel freier Farbstoff Kongorot 1,6 Diplodinium, Entodinium sehr viel freier Farbstoff Methylenblau 0,4 Diplodinium, sehr schwache blaue Färbung Entodinium der Protozoen, einige ungefärbt Methylenblau 0,8 Diplodinium, Entodinium etwas stärkere Färbung Methylenblau 1,2 alle noch stärkere Färbung, Dipl. und Ent. i. d. R. schwächer gefärbt, evtl. Überfärbung Methylenblau 1,6 alle schlechtestes Färbeergebnis, Hintergrund scheint auch gefärbt, mehr Farbpartikel zu sehen, wenig Protozoen gefärbt Eosinlösung 0,4 - Hintergrund färbt sich rosa, Protozoen nicht Eosinlösung 0,8 Entodinium, Hintergrund stärker rosa, auch Diplodinium Dipl. und Ent. rosa, Ciliaten nicht, obwohl sie noch vital sind Eosinlösung 1,2 Entodinium, Hintergrund stark rosa, sonst Diplodinium s. o. Eosinlösung 1,6 Entodinium, Hintergrund zu stark gefärbt um Diplodinium etwas erkennen zu können Malachitgrün 0,4 - Hintergrund grünlich, Protozoen nicht gefärbt Malachitgrün 0,8 Entodinium, einige Dipl. und Ent. haben den Diplodinium Farbstoff aufgenommen, schwierig von normalem Futter unterscheidbar Malachitgrün 1,2 Entodinium, Diplodinium s. o.
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8 Literaturverzeichnis - 97 - ABBIT
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Tab. 9.85: i-Buttersäureproduktion
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Tab. 9.145: Vergleich der Silagezul
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