Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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- 44 - bad. Ein Deckel verhinderte das Absetzen von Kondenswasser aus dem Wasserbad in den Röhrchen. Anschließend wurde eine Pansensaftprobe frisch aus dem fistulierten Versuchstier entnommen und in jedes Röhrchen fünf mL geseihter Pansensaft gefüllt. Drei der Ansätze wurden mit der entsprechenden Menge vorgewärmten Farbstoffs versetzt und anschließend im Wasserbad für zwei Stunden gelagert. Der vierte Ansatz lagerte vor der Zugabe des Farbstoffs zunächst vier Stunden im Kühlschrank. Die Beurteilung erfolgte wie bei den anderen Ansätzen nach zwei Stunden. Nach der Lagerung der Proben wurden diese mit 28.000 xg fünf Min. bei RT zentrifugiert und der Überstand verworfen. Der Bodensatz wurde in 0,4 mL 0,9 %iger NaCl gelöst, 20 µL dieser Lösung auf einen Objektträger gegeben und mit einem Deckgläschen abgedeckt. Um eine adäquate Menge an Protozoen zu erfassen, wurden aus jeder Probe 100 Zellen gezählt und mit -, +, ++ oder +++ beurteilt. Um einen tagesabhängigen Effekt auszuschließen, erfolgten Wiederholungen der Versuche an drei weiteren Tagen.
100% 80% 60% 40% 20% 0% ohne Zusatz 100% 80% 60% 40% 20% 0% ohne Zusatz 100% 80% 60% 40% 20% 0% ohne Zusatz - 45 - Hefe Stärke Kontr. ohne Zusatz Kontr. Hefe Hefe Stärke Kontr. Kontr. ohne Hefe Zusatz Hefe Stärke Kontr. ohne Zusatz Kontr. Hefe Kontr. Stärke Kontr. Stärke Kontr. Stärke Kongorot Abb. 3.2: Vitalfärbung von Protozoen mit verschiedenen Zusätzen zu den Farbstoffen, (n=8) - keine Färbung der Protozoen erkennbar + leichte Färbung erkennbar, bzw. geringe Füllung mit Stärke/Hefe ++ Protozoen gefärbt, bzw. mindestens zur Hälfte mit Stärke/Hefe gefüllt +++ Protozoen intensiv gefärbt, bzw. vollständig mit Stärke/Hefe gefüllt Bei Einsatz aller drei Farbstoffe zeigte die Negativkontrolle, dass keine Farbstoffaufnahme durch nicht mehr lebensfähige Protozoen erfolgte. Eine Beurteilung der Färbung der Protozoen allein durch den Farbstoff war bei keinem Farbstoff möglich (s. Abb. 3.2). Hefe oder Stärke mussten gefärbt werden, um indirekt differenzieren zu können, welche Protozoen den Farbstoff aufnahmen. Im - + ++ +++ Methylenblau nach Löffler - + ++ +++ Janusgrün - + ++ +++
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