Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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- 136 - PCR-Bedingungen Nachweis von 16S, DNAX, 2. PCR, BoNT-C1+2, D, cpa (allgemeines Cl. perf. Toxingen) 25 µl Ansatz: Ausgangskonzentration pro Ansatz (25µl), Rest H2O Endkonzentration 10x PCR-Puffer (Invitrogen) 2,5 1 fach je 5 µM Primer F/R 2,5 je 0,4,µM 50 mM MgCl2 1,0 2 mM je 10 mM dNTPs 0,5 je 0,2 mM 5 U/µl Taq (Invitrogen) 0,2 1 U 23 µl PCR-Mix und 2 µl DNA bzw. PCR-Produkt der 1. PCR oder H20 Nachweis von DNAX 1. PCR 25 µl Ansatz: Ausgangskonzentration pro Ansatz (25µl), Rest H2O Endkonzentration 10x PCR-Puffer (Invitrogen) 2,5 1 fach je 5 µM Primer F/R 2,5 je 0,4,µM 50 mM MgCl2 1,5 3 mM je 10 mM dNTPs 0,5 je 0,2 mM 5 U/µl Taq (Invitrogen) 0,2 1 U 23 µl PCR-Mix und 2 µl DNA bzw. PCR-Produkt der 1. PCR oder H20 Nachweis von BoNT A,B, E,F Ausgangskonzentration pro Ansatz (25µl), Rest H2O Endkonzentration 10x PCR-Puffer (Invitrogen) 2,5 1 fach je 10 µM Primer F/R 2,5 je 0,4,µM 50 mM MgCl2 0,75 1,5 mM je 10 mM dNTPs 0,5 je 0,2 mM 5 U/µl Taq (Invitrogen) 0,2 1 U 20 µl Mix pro Reaktion + 5 µl DNA / H2O
Für 16S, DNAX 2. PCR, cpa, BoNT D 95°C 3 min 95°C 30 sec 55°C 30 sec 72°C 45 sec Für DNAX 1.PCR, BoNT C1+2 95°C 3 min 95°C 30 sec 58°C 30 sec 72°C 45 sec Für Nachweis von BoNT A, B, E und F 95°C 3 min 95°C 30 sec 55°C 30 sec 72°C 45 sec 35 x 35 x 35 x - 137 - bei nested-PCRs nach der 1. PCR einen Exo-SAPI-Verdau anschließen: 2,4 µl H20 55°C 283 A: Bot A F/R 35 Zyklen bp 55°C 205 B: CMBL 1+2 35 Zyklen bp 55°C 389 E: CMBL 1+2 35 Zyklen bp 55°C 332 F: Bot F F/R 35 Zyklen bp
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Tierärztliche Hochschule Hannover
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„Was wir wissen, ist ein Tropfen,
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II 3.5 Literaturangabe zur Analyse
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Abkürzungsverzeichnis AS Aminosäu
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1 Einleitung - 1 - In den letzten z
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2.2 Protozoen des Pansens - 3 - Ein
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Fortsetzung Tab. 2.2 Epidinium caud
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- 7 - Überleben von K. aerogenes m
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- 9 - 6 % solche wie Enterococcus f
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- 11 - 2.4.1.1 Eintragsquellen von
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- 13 - gegen B-M nur minimal toxisc
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- 15 - Tab. 2.6: Unterschiede der r
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- 17 - REINSTEIN et al. 2007; CALLA
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- 19 - der Überlebensfähigkeit da
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- 21 - zoen überleben (KING et al.
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- 23 - Hemmung der Salmonellen. In
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3 Material und Methoden - 25 - Reag
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3.2.2 Herkunft der Silagen - 27 - Z
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- 29 - Tab. 3.2: Während der acht
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- 31 - 3.4.1.1 Die Clostridienzulag
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- 33 - Tab. 3.5: Kriterien zur Beur
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- 35 - Fortsetzung Tab. 3.6 Janusgr
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- 37 - Tab. 3.8: Ergebnisse der Vor
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- 39 - Fortsetzung Tab. 3.8 Methylg
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- 41 - Fortsetzung Tab. 3.9 Methylg
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Fortsetzung Tab. 3.12 Methylenblau
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100% 80% 60% 40% 20% 0% ohne Zusatz
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- 47 - 3.8.2 Färbemethoden zur Dif
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4 Ergebnisse - 49 - In der Ergebnis
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mmol/L 27 18 9 0 - 51 - 0 2 4 6 8 1
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- 53 - bzw. 45,4 % über denen von
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% 140 70 0 % 140 70 0 - 55 - Tag 10
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- 57 - Eine verlängerte neuntägig
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- 59 - Fortsetzung Tab. 4.6 C. botu
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- 61 - Tab. 4.8: Prozentualer Unter
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Tab. 4.10: Prozentuale Veränderung
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Fortsetzung Tab. 4.11 Zulage n-Vale
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Hefefüllung - 67 - Abb. 4.7: Proze
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- 69 - Auch bei Zulage von 2 mL C.
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- 71 - 4.5 Ergebnisse der PCR-Unter
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5 Diskussion 5.1 Intention der Arbe
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- 75 - Versuchen nur eine Protease,
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5.5 Statistik - 77 - Die statistisc
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- 79 - Auch bei Zulage von C. botul
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% 70 30 -10 Schadsilagenzulage- mik
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% 70 30 -10 Schadsilagenzulage- mik
Seite 95 und 96: - 85 - 5.6.2.3 Bakterieller Protein
Seite 97 und 98: - 87 - Aminosäuren aufwies, gefolg
Seite 99 und 100: - 89 - 5.6.4 Auswirkungen auf die P
Seite 101 und 102: - 91 - Durch die enormen Kosten der
Seite 103 und 104: - 93 - Irle, Annika (2011): Untersu
Seite 105 und 106: - 95 - Irle, Annika (2011): In vitr
Seite 107 und 108: 8 Literaturverzeichnis - 97 - ABBIT
Seite 109 und 110: - 99 - BERGERE, J. L., M. ROUSSEAU
Seite 111 und 112: - 101 - CALLAWAY, T. R., R. O. ELDE
Seite 113 und 114: - 103 - DARGATZ, D. A., S. J. WELLS
Seite 115 und 116: - 105 - FIELDS, B. S, E. B. SHOTTS,
Seite 117 und 118: - 107 - GOEPFERT, J. M., u. R. HICK
Seite 119 und 120: - 109 - HENTGES, D. J. (1967): Infl
Seite 121 und 122: - 111 - KALZENDORF, C. (2004): Stra
Seite 123 und 124: - 113 - LYTTLETON, J. W. (1973): Pr
Seite 125 und 126: - 115 - MITSCHERLICH, E., S. GÜRT
Seite 127 und 128: - 117 - POPOFF, M. R., u. J. LECOAN
Seite 129 und 130: - 119 - SCHIMMEL, D. (2002): Ergebn
Seite 131 und 132: - 121 - STOUTHAMER, A. H. (1979): T
Seite 133 und 134: - 123 - WALLIS, O. C., u. G. S. COL
Seite 135 und 136: 9 Anhang - 125 - 9.1 Nährstoffanal
Seite 137 und 138: - 127 - Fortsetzung Tab. 9.6 Küvet
Seite 139 und 140: - 129 - 9.5 Methodenbeschreibung de
Seite 141 und 142: Zusammensetzung des Clostridien-Med
Seite 143 und 144: - 133 - Cl. botulinum-Diagnostik mi
Seite 145: Bot A-F/R FW: tgc agg aca aat gca a
Seite 149 und 150: Tab. 9.9: pH-Werte in der Fermenter
Seite 151 und 152: Tab. 9.13: pH-Werte in der Fermente
Seite 153 und 154: Tab. 9.17: Ammoniakkonzentration (m
Seite 155 und 156: Tab. 9.21: Überstandsvolumen (mL)
Seite 157 und 158: Tab. 9.25: Gasproduktion (mL) währ
Seite 159 und 160: Tab. 9.29: Methankonzentration (Vol
Seite 161 und 162: Tab. 9.33: Methankonzentration (Vol
Seite 163 und 164: Tab. 9.37: Wasserstoffkonzentration
Seite 165 und 166: Tab. 9.41: Kohlendioxidkonzentratio
Seite 167 und 168: Tab. 9.45: Stickstoffkonzentration
Seite 169 und 170: Tab. 9.49: Sauerstoffkonzentration
Seite 171 und 172: Tab. 9.53: Sauerstoffkonzentration
Seite 173 und 174: Tab. 9.57: Proteingehalt (µg/mL RS
Seite 175 und 176: Tab. 9.61: Essigsäurekonzentration
Seite 177 und 178: Tab. 9.65: Essigsäureproduktion (m
Seite 179 und 180: Tab. 9.69: Propionsäurekonzentrati
Seite 181 und 182: Tab. 9.73: Propionsäurekonzentrati
Seite 183 und 184: Tab. 9.77: Propionsäureproduktion
Seite 185 und 186: Tab. 9.81: i-Buttersäurekonzentrat
Seite 187 und 188: Tab. 9.85: i-Buttersäureproduktion
Seite 189 und 190: Tab. 9.89: n-Buttersäurekonzentrat
Seite 191 und 192: Tab. 9.93: n-Buttersäurekonzentrat
Seite 193 und 194: Tab. 9.97: n-Buttersäureproduktion
Seite 195 und 196: Tab. 9.101: i-Valeriansäurekonzent
Seite 197 und 198:
Tab. 9.105: i-Valeriansäureprodukt
Seite 199 und 200:
Tab. 9.109: n-Valeriansäurekonzent
Seite 201 und 202:
Tab. 9.113: n-Valeriansäurekonzent
Seite 203 und 204:
Tab. 9.117: n-Valeriansäureprodukt
Seite 205 und 206:
Tab. 9.121: Hexansäurekonzentratio
Seite 207 und 208:
Tab. 9.125: Hexansäureproduktion (
Seite 209 und 210:
Tab. 9.129: Summe aller flüchtigen
Seite 211 und 212:
Tab. 9.133: Summe aller flüchtigen
Seite 213 und 214:
Tab. 9.137: Produktion aller flüch
Seite 215 und 216:
Tab. 9.140: Prozentualer Unterschie
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Seite 221 und 222:
Tab. 9.145: Vergleich der Silagezul
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Tab. 9.165: Prozentuale Verteilung
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Tab. 9.167: Prozentuale Verteilung
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