Doktorarbeit Endversion - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

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- 40 - schwache Färbung ausgeschlossen werden: Methylgrün, Giemsa, Hämatoxylin, Methylenblau und Trypanblau. Andere Farbstoffe zeigten bei niedrigeren Konzentrationen wie 0,4 % in der Probe keine Färbung, bei höheren Konzentrationen dagegen direkt eine Überfärbung. Hinweise auf eine Überfärbung lagen vor, wenn alle Protozoen gleichmäßig stark gefärbt waren und auch der Hintergrund eine deutliche Färbung aufwies: Fuchsin, Malachitgrün und Gentianaviolett. Färbungen, bei denen sehr viel freie Farbstoffpartikel oder ein stark gefärbter Hintergrund die Beurteilung behinderten, wurden ebenfalls von weiteren Versuchen ausgeschlossen: Brillantkresylblau, Eosin. Somit blieben Kongorot, Janusgrün und Methylenblau nach Löffler zur weiteren Testung übrig. In einem zweiten Versuchsansatz erfolgte die Färbung von Hefe und Stärke. Die zugegebene Menge wurde auf 1,2 % in der Fermenterflüssigkeit festgelegt, da hier eine ausreichende Zahl an Hefen bzw. Stärkekörnern vorhanden war und eventuell überzählige Körner die Beurteilung nicht störten. Der Versuchsablauf zur Überprüfung der Hefe- bzw. Stärkeaufnahme entspricht den oben beschriebenen Schritten zur Färbung der Protozoen mit Farbstoff ohne Zusatz. Die Ergebnisse der Hefe- bzw. Stärkeaufnahme sind in Tab. 3.11 zusammengefasst. Zur Beurteilung der Hefe- bzw. Stärkeaufnahme durch die Protozoen wurde ein Score entwickelt, der den Füllungsgrad der Einzeller definiert (Tab. 3.10). Vor Einsatz der mit Stärke oder Hefe versetzten Färbelösungen wurde von jeder Lösung ein Tropfen unter dem Mikroskop beurteilt, um sicherzustellen, dass Stärke und Hefe gefärbt waren (s. Tab. 3.9). Tab. 3.9: Färbung von Hefe und Stärke in der Färbelösung Farbstoff Färbung Stärke Hefe Kongorot gut gefärbt sehr stark gefärbt Methylenblau gefärbt gut gefärbt Eosin Hintergrund so Hintergrund stark stark gefärbt, dass gefärbt, aber Hefen man nicht sehen kann, ob Stärke gefärbt dunkler rot Malachit Stärke gut gefärbt Hefe gut gefärbt Brillantkresylblau Hintergrund stark gefärbt Hefefärbung gut Giemsa nicht gefärbt, nicht gefärbt, Farbstoff sehr Farbstoff sehr krümelig krümelig Methylenblau nach Loeffler schwach gefärbt gut gefärbt
- 41 - Fortsetzung Tab. 3.9 Methylgrün Stärke nicht gefärbt Hefe gut gefärbt, Hintergrund allerdings auch Trypanblau gute Färbung gute Färbung Fuchsin Hintergrund stark gefärbt Hefefärbung gut Gentianaviolett Hintergrund sehr Hintergrund sehr stark gefärbt stark gefärbt Hämatoxylin keine Färbung keine Färbung Janusgrün schwache Färbung gute Färbung der Hefe Tab. 3.10: Ermittlung des Scores für die Hefeaufnahme der Pansenprotozoen Score Kriterien zur Beurteilung der Hefeaufnahme - Protozoen haben keine Hefe aufgenommen + Protozoen haben wenig Hefe aufgenommen ++ Protozoen sind zur Hälfte mit Hefe gefüllt +++ Protozoen sind zu zwei Dritteln oder vollständig mit Hefe gefüllt Tab. 3.11: Ergebnisse der Vorversuche zur Findung einer Vitalfärbung für Protozoen- Zugabe des Farbstoffs mit Zusatz von Stärke oder Hefe Farbstoff Färbung Stärke Hefe Kongorot schwach gefärbt, in stark gefärbt, sehr gut in Protozoen zu erkennen den Protozoen zu erkennen Methylenblau schwach gefärbt, nach schwach gefärbt, nach Aufnahme in Protozoen Aufnahme in Protozoen kommt es zu Farbstoffverlust Farbverlust Eosin Stärke schlecht gefärbt Hefe gut gefärbt, aber insgesamt war der Farbton heller als Kongorot Malachit Farbstoffverlust bei Stärke Hefe in den Protozoen in den Protozoen nicht gefärbt Brillantkresylblau Farbstoffverlust Färbung der Hefe schlecht in Protozoen zu erkennen Giemsa Stärke nicht gefärbt Hefe nicht gefärbt Methylenblau nach Stärke schwach gefärbt gefärbte Hefe gut in den Loeffler Protozoen zu erkennen Methylgrün Farbstoffverlust bei Stärke Farbstoffverlust bei Hefe in den Protozoen in den Protozoen
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