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Laboratorio de Genética: Genética Hereditaria
Verificar que haya como mínimo 750.000 linfocitos. Se puede incrementar la siembra hasta 0,5 ml.
c) Bloqueo en metafase
Añadir colchicina, homogeneizar y meter en estufa de 37º c durante 2 horas
d) Choque hipotónico
Durante la incubación prepararemos los tubos necesarios con la solución hipotónica y la dejaremos a
temperatura ambiente.
Centrifugar los cultivos.
Eliminar el medio de cultivo y agitar con cuidad pero insistentemente el botón celular
Con pipeta pasteur añadir unos 2 ml de la solución hipotónica a temperatura ambiente,
homogeneizando bien
Completar el resto de la solución hasta los 8 ml, homogeneizar y dejar actuar 10 minutos
e) Fijación
- Centrifugar durante 7 minutos
- Eliminar el sobrenadante y agitar con cuidado pero insistentemente el botón celular.
- Añadir la solución de fijador (metanol/acético 3 a1) poco a poco pipeteando hasta unos 6 ml. (Verificar
que no tiene grumos).
- Dejar actuar durante 10 minutos.
- Centrifugar y eliminar el sobrenadante.
- Repetir esta operación tres veces.
- Agitar el botón celular y añadir unos 6ml de fijador. Guardar en la nevera.
f) Extensiones
- Generalmente se hacen al día siguiente, pero se pueden hacer varios días después. Incluso se puede
guardar la suspensión celular sobrante en el congelador durante meses y hacer extensiones adicionales
cuando se precisen.
turbia.
- Dar tres pases de fijador recién preparado.
- Eliminar el último fijador, agitar y añadir fijador hasta conseguir una suspensión celular ligeramente
- Durante este proceso prepararemos la canastilla de portas en metanol al 80 %. La dejaremos a
temperatura ambiente.
- Coger un porta de la canastilla y secar con un papel de filtro por ambas caras.
- Es muy importante que las extensiones salgan bien, por lo que es conveniente dedicar una mañana
cada semana a esta tarea. Si las metafases están muy cerradas enjuagar los portas en agua destilada, tirar la
gota desde más altura, facilitar secado rápido en placa caliente o soplar ligeramente. Incluso se puede
aumentar la concentración de acido acético para conseguir abrirlas. Si las metafases están muy abiertas utilizar
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