TUYEÅN TAÄP

- Chặt những cây đạt tiêu chuẩn, chú ý chặt bỏ gốc ở cách bẹ lá cuối cùng 1
lóng. Cắt bỏ toàn bộ phiến lá đến hết ngọn, cắt bỏ tai lá xung quanh, đem mẫu về dựng
dốc ngược ngọn xuống để nước không đọng vào trong bẹ lá.
* Lưu ý: Không được lấy mẫu vào lúc mưa, sau mưa 1 tuần mới được lấy mẫu,
tránh trường hợp nước mưa vào trong mắt mía để hạn chế sự lây nhiễm khi vào mẫu.
1.2 Khử trùng mẫu
- Bóc bỏ bẹ lá già, lau hết phấn bám trên mẫu, dốc ngược ngọn mía và dùng
khăn nhúng cồn 70 o lau thật sạch.
- Cắt bớt mẫu chỉ chừa lại 1/2 lóng mía gần bẹ lá dưới cùng đồng thời cắt 1
phần trên của bẹ lá bao ngoài lần lượt cho đến ngọn mía (phần lá non màu trắng lộ ra).
Dùng khăn nhúng cồn 70 o lau lại thật sạch và đưa vào phòng cấy vô trùng để chuẩn bị
vào mẫu.
1.3 Vào mẫu (khởi tạo mẫu)
- Tiến hành bóc bỏ lần lượt bẹ lá bên ngoài. Tách các mắt mầm với kích thước
1 cm x 2 cm. Cấy mỗi mắt mầm vào bình tam giác 250 ml có chứa 70 ml môi trường
M 1 . Khi cấy mẫu lưu ý phần mặt cắt phải để tiếp xúc với môi trường.
- Thành phần môi trường M 1 gồm:
MS + 30 g/l đường + 150 ml/l nước dừa + 7,0 g/l agar + 0,5 - 0,75 mg/l BAP.
- Chuyển các bình chứa mẫu khởi tạo về phòng nuôi cây (nhiệt độ 24 –26 o C, độ
ẩm 65 – 70% , ánh sáng 3000 lux với thời gian chiếu sáng 10 giờ/ngày). Sau 2 – 3
tuần, khi các chồi non của mắt mầm nhú lên khoảng 3 – 4 cm thì cấy chuyển sang môi
trường M 2 để tạo cụm chồi.
* Chú ý: Trong giai đoạn này, nếu giống mía có đặc tính tiết ra nhiều phenol
làm đen môi trường, cản trở việc hút chất dinh dưỡng của mẫu thì phải cấy chuyển
bằng cách làm sạch mẫu, cắt bỏ hết những phần đen chỗ tiếp xúc mẫu với môi trường
và cấy sang bình môi trường M 1 khác.
1.4 Tạo cụm chồi
- Lấy chồi từ môi trường M 1 , dùng dao và panh cắt bỏ phần dưới của mẫu, chỉ
lấy phần mầm chồi phía trên, bóc bỏ các phần bẹ lá bao bên ngoài, chẻ mẫu làm 2, cấy
vào bình tam giác 250 ml có chứa 70 ml môi trường M 2 , áp mặt cắt lên môi trường.
- Thành phần môi trường M 2 gồm:
MS + 30 g/l đường + 150 ml/l nước dừa + 7,0 g/l agar + 2,0 – 2,5 mg/l BAP.
- Chuyển các bình chứa mẫu về phòng nuôi cây. Sau 3 – 4 tuần, các mẫu phát
triển thành cụm chồi, tiến hành cấy chuyển sang môi trường M 3 .
2. Nhân nhanh in-vitro
2.1 Nhân nhanh cụm chồi
- Cụm chồi được lấy ra từ môi trường M 2 , làm sạch cụm chồi, cạo bỏ các phần
dơ bao quanh, cắt ngắn bớt phần ngọn của chồi (≤1/3 chiều cao của chồi), tách nhỏ
cụm chồi khoảng 5 – 7 chồi/1 cụm và cấy chuyển sang bình tam giác 250 ml có chứa
80 ml môi trường M 3 .
- Thành phần môi trường M 3 gồm:
MS + 30 g/l đường + 150 ml/l nước dừa + 7 g/l agar + 1,5 – 2,0 mg/l BAP + 0,5 mg/l
kinetin.
- Đưa bình chứa mẫu vào phòng nuôi cây, sau 3 – 4 tuần thì cấy chuyển 1 lần.
Tùy theo nhu cầu số lượng cây cần nhiều hay ít mà số lần cấy chuyển khác nhau
89