Histologia Básica, Texto e Atlas - 12ª Edição - Junqueira & Carneiro

Histologia Básica
.,.. Introdução
Histologia é o estudo das células e dos tecidos do corpo
e de como essas estruturas se organizam para constituir
os órgãos. Em razão das pequenas dimensões das células,
seu estudo é realizado com auxílio de microscópios. Neste
capítulo esses instrumentos serão apresentados, e algumas
maneiras usadas para preparar as células, os tecidos
e órgãos para análise microscópica serão abordadas. Além
disso, serão descritas algumas das metodologias mais uti·
lizadas para investigar a função e o metabolismo dessas
estruturas.
.,.. Preparação de espécimes
. , .
para exame m1croscop1co
A pequena dimensão das células e dos componentes da
matriz extracelular (MEC) contida entre as células faz com
que a histologia dependa do uso de microscópios. Pesquisas
em química, fisiologia, imunologia e patologia são ftu1damentais
para um conhecimento adequado da biologia das
células, dos tecidos e órgãos e de como seus vários componentes
interagem na saúde e na doença. Conhecer as ferramentas
e os métodos de investigação também é essencial
para a compreensão adequada da estrutura e do funcionamento
das células, dos tecidos e órgãos.
O procedimento mais usado no estudo de tecidos ao
microscópio de luz consiste na preparação de cortes his·
tológicos. No microscópio de luz (também chamado de
microscópio óptico ou fotônico) a imagem se forma a partir
dos raios luminosos de um feixe de luz que atravessou
uma estrutura. Células vivas, camadas muito delgadas de
células ou de tecidos, membranas transparentes de animais
vivos (p. ex., o mesentério, a cauda de um girino, a parede
de uma bolsa existente na bochecha de hamsters) podem
ser observadas diretamente ao microscópio. Dessa maneira,
é possível estudar essas estruturas por longos períodos sob
diferentes condições fisiológicas ou experimentais. Em
contrapartida, na maioria dos casos os tecidos e órgãos são
espessos e não possibilitam a passagem adequada da luz
para a formação de uma imagem. Por essa razão, antes de
serem examinados ao microscópio eles devem ser fatiados
em secções ou cortes histológicos muito delgados que são
colocados sobre lâminas de vidro. Os cortes são obtidos por
meio de instrumentos de grande precisão chamados micrótomos,
mas antes os tecidos e órgãos necessitam passar por
uma série de tratan1entos que serão descritos a seguir.
• Fixação
Logo após sua remoção do corpo, células ou fragmentos
de tecidos e órgãos devem ser submetidos a wn processo
chamado fixação, que tem várias finalidades: evitar
a digestão dos tecidos por enzimas existentes nas próprias
células (autólise) ou em bactérias; endurecer os fragmentos;
preservar em grande parte a estrutura e a composição
molecular dos tecidos. A fixação pode ser feita por métodos
químicos ou, menos frequentemente, por métodos fisicos
(ver mais adiante). Na fixação química os tecidos são imersos
em soluções de agentes desnaturantes ou de agentes que
estabilizam as moléculas ao formar pontes com moléculas
adjacentes. Essas soluções são chamadas de fixadores.
Como demora algum tempo para que o fixador se difunda
de maneira rápida e completa pelo interior dos fragmentos,
um grande fragmento deve ser cortado em outros
menores antes de ser imerso no fixador. Dessa maneira,
torna-se mais fácil a penetração do fixador no fragmento e
garante-se melhor preservação da sua estrutura. De modo
alternativo, pode ser utilizada a perfusão intravascular do
fixador, o qual, então, alcança o interior dos tecidos rapidamente
pelos vasos sanguíneos, resultando em uma fixação
melhor.
Um dos fixadores mais usados para microscopia de luz
é uma solução de formaldeído a 4%; outro fixador bastante
utilizado é o glutaraJdeído. Em virtude da alta resolução
oferecida pelo microscópio eletrônico, é necessário um
cuidado muito maior na fixação para mais bem preservar
detalhes da ultraestrutura das células e da matriz. Para
essa finalidade uma fixação dupla, usando uma solução de
glutaraldeído tamponado, seguida por uma segunda fixação
em tetróxido de ósmio, que preserva e fornece contraste aos
lipídios e proteínas, tornou-se o procedimento padrão para
estudos ultraestruturais.
9 Para saber mais
•
Química da fixação histológica
A fixação química é um processo complexo e não muito bem elucidado.
Formaldeído e glutaraldeído são conhecidos por reagir com os
grupos amina (NH 1 ) das proteínas. No caso do glutaraldeído, a sua ação
fixadora é reforçada pelo fato de ser um dialdeído que promove a formação
mais eficiente de ligações cruzadas entre proteínas das células e
da matriz extracelular.
• Inclusão
Para obter secções delgadas com o micrótomo os fragmentos
de tecidos e órgãos devem, após a fixação, ser infiltrados
com substâncias que lhes proporcionem uma consistência
rígida. As substâncias mais utilizadas para esse fim
são a parafina e algumas resinas de plástico. A parafina é
habitualmente utilizada para microscopia de luz, e as resinas,
para microscopia de luz e eletrônica.
O processo de impregnar os tecidos com parafina é chamado
inclusão ou embebição em parafina e geralmente é
precedido por duas etapas: desidratação e clar eamento. A
água contida nos tecidos é inicialmente extraída pela passagem
dos fragmentos por diversos banhos de soluções de
concentrações crescentes de etanol (normalmente desde
etanol 70% em água até etanol 100%). Após a desidratação,
o etanol dos fragmentos deve ser substitlúdo por uma
substância intermediária (geralmente um solvente orgânico)
que é miscível tanto em etanol como no meio que foi
escolhido para inclusão (parafina ou resina). Para a inclu-