Histologia Básica, Texto e Atlas - 12ª Edição - Junqueira & Carneiro

1 1 Métodos de Estudo em Histologia
Manivela
Suporte do bloco
Bloco de parafina
Figura 1.1 Micrótomo para cortar tecidos induídos em parafina ou resina. Acionando-~ a manivela (à direita da figura), o bloco contendo o fragmento de tecído sobe e desce. Após
cada volta da manivela, o bloco avança uma distância definida (geralmente 1 a 10 µm) e, ao passar pela navalha, deixa uma fatia do tecido. (Cortesia de Microm.)
são em parafina, as substâncias intermediárias mais comumente
usadas são o xilol e o toluol. Quando os fragmentos
de tecidos são embebidos no solvente orgânico, eles ficam
transparentes ou translúcidos. Em seguida, são colocados
cm parafina derretida (56 a 60ºC). O calor causa a evaporação
do solvente orgânico, e os espaços existentes dentro dos
tecidos tornam-se preenchidos com parafina. Depois de os
fragmentos serem retirados da estufu, a parafina solidifica
e eles se tornam rígidos. Os blocos de parafina que contêm
os tecidos são então levados a um micrótomo (Figura 1.1),
onde são seccionados por uma lâmina de aço ou de vidro,
de modo a fornecer cortes de 1 a 10 micrômetros de
espessura. Lembre-se de que: um micrômetro (1 µm) =
0,001 mm= l0- 6 m; um nanômetro (1nm) =0,001 µm =
l0- 6 mm = l0- 9 m. Após serem seccionados, os cortes são
colocados para flutuar sobre uma superfície de água aquecida
e, depois, sobre lâminas de vidro, onde aderem e serão,
em seguida, corados.
• Fixação física por congelação
Um modo completamente diferente de preparar secções
de tecidos ocorre após submeter os tecidos a um
congelamento rápido; dessa maneira, os tecidos são fixados
por congelação, um método físico de fixação, tornando-se
rígidos e, assim, prontos para serem seccionados.
Um micrótomo para tecidos congelados - o criostato ou
criomicrótomo - foi desenvolvido para a produção de
cortes de tecidos congelados. Uma vez que esse método
possibilita a preparação rápida de cortes sem passar pelo
longo procedimento de desidratação e inclusão descrito
anteriormente, ele é habitualmente utilizado em hospitais
para que seja possível analisar, cm poucos minutos,
espécimes obtidos durante procedimentos cirúrgicos.
São os assim chamados "cortes por congelação". Congelar
tecidos é também muito útil para o estudo histoquímico
de enzimas e de outras proteínas em cortes histológicos;
isso porque o congelamento, ao contrário da fixação química,
não inativa a maioria das enzimas e mantém muitas
proteínas em suas conformações naturais e em seus locais
originais. Quando se deseja estudar lipídios contidos nos
tecidos, aconselha-se o uso de secções congeladas, já que a
imersão de tecidos em solventes como xilol dissolve essas
substâncias.
• Coloração
Para ser estudada ao microscópio, a maioria dos cortes
histológicos deve ser corada, porque, com poucas exceções,
os tecidos são incolores. Com essa finalidade foram
desenvolvidos métodos de coloração que tornam evidentes
os vários componentes dos tecidos, das células e da MEC.
A seletividade com que os corantes coram os componentes
dos tecidos pode ser maior ou menor. Muitos corantes se
comportam como substâncias de caráter ácido ou básico e
tendem a formar ligações eletrostáticas (salinas) com componentes
ionizados dos tecidos. Os componentes dos tecidos
que se coram bem com corantes básicos são chamados
de basófilos, e os que têm grande afinidade por corantes
ácidos, de acidófilos.
O azul de toluidina e o azul de metileno são exemplos
de corantes básicos. Outros corantes, como a hematoxilina,
comportam-se como corantes básicos e se ligam às estruturas
basófilas das células e dos tecidos. Os principais componentes
dos tecidos que reagem com corantes básicos o
fuzem por conter ácidos na sua composição - ácidos nucleicos,
glicosaminoglicanos e glicoproteínas ácidas. Por outro
lado, corantes ácidos (tais como orange G, eosina, fucsina
ácida) coram principalmente os componentes acidófilos
dos tecidos, como, por exemplo mitocôndrias, grânulos de
secreção, proteínas citoplasmáticas e colágeno.
Dentre todos os corantes, a combinação de hematoxilina
e eosina (HE) é a mais comumente utilizada. A hematoxilina
cora em azul ou violeta o núcleo das células e
outras estruturas ácidas (tais como porções do citoplasma
ricas em RNA e a matriz extracelular da cartilagem hialina).
A eosina, por outro lado, cora o citoplasma e o colágeno
em cor-de-rosa. Muitos outros corantes são usados
além da HE, como os tricrómicos (p. ex., os corantes de
Mallory e de Masson). Os tricrómicos, além de mostrarem
muito bem o núcleo e o citoplasma, ajudam a diferenciar
colágeno de músculo liso. Uma técnica especialmente boa