Histologia Básica, Texto e Atlas - 12ª Edição - Junqueira & Carneiro

1 1 Métodos de Estudo em Histologia
imagens visíveis de objetos quase transparentes (Figura 1.3A
e l.3B). Outra metodologia utilizada para observar células
ou secções de tecidos não corados é a microscopia de contraste
diferencial (microscopia de Nomarski), que produz
uma imagem aparentemente tridimensional (Figura 1.3C).
Estas imagens são sempre vistas em preto, branco e tons de
cinza.
..,. Microscopia confocal
Infelizmente a imagem fornecida pelos microscópios
não costuma ser composta de um único plano muito delgado
do corte. Geralmente, há superposição de vários
planos, os quais aparecem em foco simultaneamente, causando
certo grau de deterioração da imagem. Pa.ra resolver
esse problema foi desenvolvido o microscópio confocal,
que torna possível focalizar um plano muito delgado
do espécime.
Os fundamentos desse microscópio são:
• O espécime é Huminado por um feixe de luz muito
estreito
• A imagem coletada do espécime deve passar por um orifício
muito pequeno.
A consequência desse arranjo é que só a imagem originada
do plano focalizado alcança o detector, enquanto as
imagens de planos anteriores e posteriores são bloqueadas
(Figura 1.4). A luz proveniente de fora do plano de foco é,
em grande parte, eliminada, a definição do objeto focalizado
torna-se melhor e a localização de componentes do
espécime pode ser feita com muito mais precisão que ao
microscópio de luz.
Por motivos práticos, o seguinte arranjo é utilizado em
muitos microscópios confocaís (ver Figura 1.5): (1) a iluminação
é provida por uma fonte de laser; (2) como esta fornece
um ponto de iluminação muito pequeno, o feixe deve
ser varrido sobre o espécime para possibilitar a observação
de uma área maior; (3) o componente do espécime que é de
interesse deve ser marcado com uma molécula fluorescente
(isso significa que uma secção rotineira não pode ser estudada);
(4) a luz usada para formar uma imagem é aquela
porção que é refletida pelo espécime; (5) a luz refletida é
capturada por um detector, em que o sinal é amplificado
eletronicamente para ser visto em um monitor.
Como somente um plano focal muito delgado é focalizado
de cada vez (também chamado de secção óptica), é
possível depois reunir os vários planos de um espécime e
reconstruí-los em um objeto tridimensional. Para realizar
todas essas funções, os microscópios confocaís dependem
de grande capacidade de computação.
.... Microscopia de fluorescência
Quando algumas substâncias são irradiadas por luz de
um determinado comprimento de onda, elas emitem luz
com um comprimento de onda mais longo. Esse fenômeno
é chamado fluorescência. Na microscopia de fluorescência
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Figura 1 .3 Células da aista neural foram cultivadas e examinadas por meio de ires
sistemas ópticos dílerentes. O
preparado não está corado e as mesmas células apaream em
todas as fotografias - use as duas células pigmentadas para orientar-se em cada imagem.
A. Microscopia de luz convencional. B. Microscopia de contraste de fase. C. Microsropla
de dílerença interferendal de contraste segundo Nomarski. (A, B e C. Grande aumento.
Cortesia de S. Rogers.)
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