Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Ergebnisse
4.3 Sequenzierung der 399 bp GFAP-mRNA-Amplifikate verschiedener
Tierarten
Bei der RT-PCR mit den Primern GFAPforw und GFAPrev wurde ein 168 bp großer
Sequenzausschnitt der GFAP-mRNA amplifiziert, während das Amplifikationsprodukt der
genomischen DNA des Rindes 957 bp groß war. Diese PCR mit den oben genannten Primern
war bei folgenden Tierarten einsetzbar: Rind, Schaf, Pferd, Damwild, Rehwild, Rotwild. Bei
Huhn und Pute ergaben sich bei Verwendung dieser Primer keine Banden. Nachdem anhand
der Sequenzinformationen der bovinen GFAP-mRNA (GenBank accession no. Y08255) die
Primer bGFAPw1 und bGFAPw2 entwickelt wurden, konnten Sequenzabschnitte der GFAPmRNA
von 399 bp Größe bei allen gewählten Tierarten, außer aus Gehirngewebe von Huhn
und Pute, amplifiziert werden (s. Kapitel 3.2.3.3.2). Abbildung 6 zeigt den Nachweis der 399
bp großen GFAP-mRNA-Amplifikate der RT-PCR mittels Agarosegelelektrophorese mit
einem 2,5 prozentigen Agarosegel. Rechts und links außen ist der verwendete Marker puC
19/Msp I mit den Bandengrößen (von unten nach oben) 110/111 bp, 147 bp, 190 bp, 242 bp,
331 bp, 404 bp und 489/501 bp dargestellt.
Marker
Schwein
Wildschwein
Rind
Schaf
Pferd
Dammwild
Rehwild
Rotwild
Huhn
Pute
Negativkontrolle PCR
Marker
399 bp
Abb. 6: Nachweis der 399 bp großen GFAP-mRNA-Amplifikate
Beispiel einer Auswertung der RT-PCR (aus Kapitel 4.3) mittels
Agarosegelelektrophorese (2,5 %iges Agarosegel)
Marker puC 19/Msp I (Bandengrößen von oben nach unten: 489/501 bp, 404 bp,
331 bp, 242 bp, 190 bp, 147 bp,110/111 bp)
Negativkontrolle von PCR (s. Kapitel 3.2.3.3.2)
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