Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Material und Methoden
Tabelle 9: Restriktionsenzyme
Restriktionsenzym Konzentration (U/ml) Eingesetztes Volumen
Alu I 10000 0,5 µl
Hae III 10000 0.5 µl
MbO I 5000 0,5 µl
Msc I 3000 1 µl
Msp I 20000 0,5 µl
Sst I 0,5 µl
3.2.4 Untersuchungen zur Gewebespezifität des Gliafaserprotein-mRNA-Nachweises
3.2.4.1 Untersuchungen zur Gewebespezifität an Schweinegeweben
3.2.4.1.1 Untersuchung nativer Gewebe
Von den Geweben und Organen vom Schwein (Kapitel 3.1.1.3) wurden etwa vier Stunden
postmortem jeweils ca. 1 g von jeder Probe mit einem sauberen Messer entnommen und
100 mg davon für die RNA-Extraktion abgewogen. Die verbleibende Probenmenge wurde bei
4°C gelagert. Nach 24 Stunden wurde die RNA-Extraktion mit dem bei 4°C gelagerten
Gewebe wiederholt. Als Positivkontrolle wurde porcines Rückenmark- und Gehirngewebe
mitgeführt.
3.2.4.1.2 Untersuchung erhitzter Gewebe (75°C, 20 Minuten)
Von den verbliebenen 9 g der Proben aus der vorangegangenen Untersuchung des nativen
Gewebes wurden jeweils 1 g mit einem sauberen Messer abgeschnitten und in ein 15 ml
Zentrifugenröhrchen gegeben. Die Proben wurden bei 10.000 U/min 1 Minute zentrifugiert
und anschließend für 20 Minuten bei 75°C im Wasserbad erhitzt. Nachfolgend wurde von den
so behandelten Proben je 100 mg für die RNA-Extraktion abgewogen. Die jeweils
verbliebenen 8 g der Proben wurden bei 4°C gelagert. Nach 24 Stunden wurde dieser
Versuchsschritt mit dem bei 4°C gelagerten Probenmaterial wiederholt. Als Positivkontrolle
wurde auch bei diesem Versuch porcines Rückenmark- und Gehirngewebe mitgeführt. Dieser
Versuch wurde insgesamt dreimal durchgeführt.
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