Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Material und Methoden
3.2.4.1.3 Untersuchung erhitzter Gewebe (80°C, 30 Minuten)
Bei diesem Versuch wurden die frischen Proben von jeweils 10 g zunächst separat in der
Moulinette zerkleinert. Die Moulinette wurde vor der Bearbeitung jeder neuen Probe
gründlich mit heißem Wasser und Seifenlauge gereinigt. Beim Schwein wurden alle im
Kapitel 3.1.1.3 aufgeführten Gewebe einschließlich Rückenmark- und Gehirngewebe (Kapitel
3.1.1.1) untersucht.
Die zerkleinerten Proben wurde wie folgt aufgeteilt:
• 100 mg natives Gewebe von jeder Probe wurden für die RNA-Extraktion
abgewogen,
• je 1 g von jeder Probe wurden abgewogen und jeweils in ein separates 15 ml
Zentrifugenröhrchen gegeben, 1 Minute bei 10000 x g zentrifugiert und im
Wasserbad bei 80°C Wassertemperatur für 30 Minuten erhitzt; von den erhitzten
Proben wurde je 100 mg für die RNA-Extraktion abgewogen.
Die verbliebenen nativen Proben wurden bei 4°C gelagert. Nach 24 Stunden wurde dieser hier
beschriebene Versuch mit dem Probenmaterial, das bei 4°C gelagert wurde, wiederholt.
Dieser Versuch wurde insgesamt dreimal durchgeführt.
3.2.4.1.4 Untersuchung erhitzter Gewebe (95°C, 30 Minuten; 95°C, 60 Minuten)
In einem dritten Versuch wurde von frischen Muskel-, Herz-, Rückenmark- und Gehirn-
Gewebeproben (Kapitel 3.1.1.1 b und 3.1.1.3) je ca. 10 g entnommen, jeweils separat in der
gründlich gesäuberten Moulinette zerkleinert und wie folgt aufgeteilt:
• 100 mg natives Gewebe von jeder Probe wurden für die RNA-Extraktion
abgewogen,
• zweimal wurde je 1 g von jeder Probe abgewogen und jeweils in ein separates
15 ml Zentrifugenröhrchen überführt. Je ein Satz der so vorbereiteten Proben
wurde dann für 30 Minuten bzw. 60 Minuten im Wasserbad mit 95°C
Wassertemperatur erhitzt. Anschließend wurden wiederum je 100 mg für die
RNA-Extraktion abgewogen.
Dieser Versuch wurde ebenfalls insgesamt dreimal durchgeführt.
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