Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

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Alexandra Küfen
Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS – Gewebe in
Fleischerzeugnissen mittels RT-PCR
Im Rahmen des vorbeugenden Verbraucherschutzes haben die bovine spongiforme
Enzephalopathie (BSE), die möglichen Übertragungswege der BSE und die mit dieser
assoziierten neuen Variante der Creutzfeldt-Jakob Erkrankung (vCJD) erheblich an
Bedeutung gewonnen. In diesem Zusammenhang ist der mögliche Eintrag von spezifiziertem
Risikomaterial, insbesondere von Gewebe des zentralen Nervensystems, in die humane
Lebensmittelkette von besonderem Interesse, da ein möglicher Einsatz von Separatorenfleisch
und Gehirngewebe als Emulgator in Brüh- und Kochwürsten nicht ausgeschlossen werden
kann.
Das in dieser Arbeit verwendete molekularbiologische Verfahren zur Detektion von ZNS-
Gewebe in Fleischerzeugnissen basiert auf dem für die Tierart Rind gewebespezifischen
Nachweis eines 168 bp großen Fragments der mRNA des sauren Gliafaserproteins (GFAP)
mittels reverser Transcriptase- Polymerase Kettenreaktion (RT-PCR). Im Anschluss an die
RT-PCR wird die Bestimmung der Tierart Rind mittels eines Restriktionsfragment
Längenpolymorphismus (RFLP) durchgeführt.
Die Untersuchungen zur Gewebespezifität der GFAP-mRNA beim Schwein und Schaf
zeigen, dass die hier verwendete Methode anscheinend nicht geeignet ist, um ZNS-Gewebe
von Schaf und Schwein in Fleischerzeugnissen mit ausreichender Gewebespezifität
nachzuweisen. Daher ist bisher nur die bovine GFAP-mRNA ein sicherer Marker für ZNS-
Gewebe. Deshalb muss die bovine Herkunft dieses Signals verifiziert werden. Durch die
Entwicklung der RT-PCR mit den Primern bGFAPw1 und bGFAPw2 und die anschließende
Sequenzierung der erhaltenen Amplifikate konnten die notwendigen Sequenzinformation zum
entsprechenden GFAP-mRNA Abschnitt der Tierarten Schwein, Schaf, Pferd, Damwild,
Rehwild und Rotwild erarbeitet werden. Durch die Restriktionsenzyme Hae III und Msc I ist
die GFAP-mRNA der Tierart Rind sicher identifizierbar.
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