Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Material und Methoden
3.2.5 Untersuchungen zum Einfluss fleischtechnologischer Parameter auf den
Nachweis boviner GFAP-mRNA
3.2.5.1 Nachweis der bovinen GFAP-mRNA in unterschiedlich erhitzten
Brühwursterzeugnissen
3.2.5.1.1 Herstellung einer mit Gehirngewebe dotierten Brühwurst bei 75°C
Wasserbadtemperatur
Für die Herstellung einer Brühwurst mit verschiedenen Konzentrationsstufen an
Rindergehirnhomogenat wurde Brät für pasteurisierte Fleischerzeugnisse (Kapitel 3.2.1.1.1)
und Gehirnhomogenat (Kapitel 3.1.1.1) wie folgt miteinander vermengt (Tabelle 10):
Tabelle 10: Dotierung des Brätes mit bovinem Gehirngewebe
Konzentration
im Fleischerzeugnis
Einwaage an Brät
Einwaage an
Rindergehirnhomogenat
0 % 100 g 0 g
0, 25 % 199,5 g 0,5 g
0,5 % 199 g 1 g
1 % 99 g 1 g
5 % 95 g 5 g
100 % 0 g 10 g
Anschließend wurden die einzelnen Brät-Rindergehirn-Gemische nochmals in der Moulinette
vermengt, um eine möglichst homogene Verteilung des Gehirngewebes in der
Brühwurstmasse zu gewährleisten. Dann wurde von den so vermengten Gemischen je 100 g
abgewogen und jeweils separat in 200 ml Probengefäße unter Vermeidung größerer
Luftblasen eingefüllt. Die 10 g natives Gehirngewebe wurden in ein 15 ml
Zentrifugenröhrchen gegeben. Die Reaktionsgefäße wurden nachfolgend für 65 Minuten in
ein Wasserbad mit 75°C Wassertemperatur verbracht. Von den so gewonnenen Produkten
wurden nach Abkühlung jeweils 100 mg für die RNA-Extraktion abgewogen und
weiterverarbeitet. Die weitere Probenentnahme fand im wöchentlichen Abstand über einen
Zeitraum von 35 Tagen statt. Der hier beschriebene Versuch wurde insgesamt viermal
durchgeführt. Die Dotierung einer Probe mit 0,25 % Rindergehirngewebe erfolgte nur in einer
der vier durchgeführten Versuchsreihen. Bei einem dieser Versuche wurde zusätzlich ein
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