Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Material und Methoden
30 Minuten bei 80°C Wasserbadtemperatur erhitzt. Daraufhin wurden wiederum
von jeder Probe je 100 mg für die RNA-Extraktion abgewogen.
Das verbliebene native Gewebe wurde bei 4°C gelagert. Dieser Versuch wurde mit dem bei
4°C eingelagerten Probenmaterial nach 24 Stunden wiederholt, und ebenfalls insgesamt
dreimal durchgeführt.
3.2.4.2.4 Untersuchung erhitzter Gewebe (95°C, 30 Minuten; 95°C, 60 Minuten)
In einem dritten Versuch wurde von frischem Muskel-, Herz-, Rückenmarkgewebe je 10 g
entnommen, in einer gründlich gesäuberten Moulinette jeweils separat zerkleinert und wie
folgt aufgeteilt:
• für die RNA-Extraktion wurden 100 mg natives Gewebe von jeder Probe
abgewogen,
• zweimal je 1 g von jeder Probe abgewogen, in ein separates 15 ml
Zentrifugenröhrchen gegeben und im Wasserbad mit 95°C Wassertemperatur
erhitzt. Die Erhitzungsdauer betrug für den einen Satz der Proben 30 Minuten und
den anderen Satz Proben 60 Minuten. Daraufhin wurden für die RNA-Extraktion
wiederum je 100 mg abgewogen.
Dieser Versuch wurde ebenfalls insgesamt dreimal durchgeführt.
3.2.4.3 Einfluss von Gewebe des peripheren Nervensystems auf den Nachweis
porciner und oviner GFAP-mRNA
Anteile des peripheren Nervengewebes von Schaf und Schwein (Kapitel 3.1.1.2) wurden
zunächst mit einem sauberen Messer fein zerkleinert und dann wie folgt aufgeteilt:
• 100 mg natives Gewebe wurden für die RNA-Extraktion abgewogen,
• das restliche Gewebe wurde in ein 15 ml Zentrifugenröhrchen gegeben, 1 Minute bei
10000 x g zentrifugiert und anschließend im Wasserbad für 60 Minuten bei 80°C
Wassertemperatur erhitzt. Daraufhin wurden von jeder Probe je 100 mg für die RNA-
Extraktion abgewogen.
Dieser Versuch wurde insgesamt dreimal durchgeführt.
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