Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Diskussion
Die Leberwurst repräsentiert durch die Verwendung von Leber zum einen ein enzymreiches,
und zum anderen, durch die Verwendung von Kategorie 3 Fleisch (50 % Fettgewebe, 50 %
Muskelgewebe), ein sehr fetthaltiges Fleischerzeugnis. Die Leberenzyme, die möglicherweise
zu einem beschleunigten Abbau der GFAP-mRNA beitragen, hatten keinen Einfluss auf den
Nachweis der bovinen GFAP-mRNA. Ein möglicher Einfluss des Fettgehaltes auf den
Nachweis der GFAP-mRNA (optische Reduktion der Bandenintensität bei der Detektion der
Ergebnisse in der Agarosegelelektrophorese) konnte mit einem zusätzlichen
Zentrifugationsschritt nach Herstellerangaben bei der RNA-Extraktion behoben werden (s.
Kapitel 3.2.3.1). Ein direkter Einfluss des Fettgewebes auf den Nachweis der GFAP-mRNA
wurde nicht festgestellt.
5.3.3 Vollkonserven
Aus Brühwurstbrät für sterilisierte Fleischerzeugnisse (s. Kapitel 3.2.1.1.2) wurden
Vollkonserven hergestellt (Versuchsbedingungen: Kesseltemperatur. 115°C, Kerntemperatur:
110°C, F-Wert > 5). Bei der Untersuchung der Vollkonserven (s. Kapitel 4.2.1.5.1) mit
wöchentlicher Beprobung waren von 48 getesteten, mit bovinem ZNS dotierten Konserven
insgesamt 36 falsch negative Ergebnisse aufgetreten, wobei an Tag 0 mit 6 von 12 die
wenigsten falsch negativen Ergebnisse nachweisbar waren.
Bei der Untersuchung der im vierwöchentlichen Abstand beprobten Vollkonserve (s. Kapitel
4.2.1.5.2) waren von insgesamt 36 mit Gehirngewebe dotierten Konserven 18 falsch negative
Ergebnisse identifizierbar. Davon kamen an Tag 0 keine falsch negativen Ergebnisse vor.
Die Tatsache, dass bei beiden Versuchen mit Vollkonserven an Tag 0 die wenigsten falsch
negativen Ergebnisse auftraten, und dass in dem nachfolgenden Untersuchungszeitraum
verschiedene Ergebnisse ermittelt wurden, lassen den Schluss zu, dass die GFAP-mRNA bei
sehr hohen Temperaturen, wie sie bei der Konservenherstellung auftreten, möglicherweise
instabil wurde und somit nicht mehr über einen längeren Zeitraum nachweisbar war. Als
Ursache für den Abbau der GFAP-mRNA während und nach der Konservenherstellung
kommen mehrere Möglichkeiten in Frage. Zum einen können durch Additive bei der
Konservenherstellung entstandene PCR-Inhibitoren und Inhibitoren der reversen
Transkriptase (RAM et al. 1996) die Amplifikation des 168 bp großen GFAP-mRNA
Fragmentes verhindern. Zum anderen kann das Zusammenwirken von Additiven und hohen
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