Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Wissenschaftliches Schrifttum
NSE (LÜCKER et al. 1999, 2000, 2001) und GFAP (SCHMIDT et al. 1999a; LÜCKER et al.
2000) zeigte der Nachweis von PRP C eine geringe Korrelation mit den ZNS-Gewebe-
Gehalten auf. Somit war PRP C im Gegensatz zu PrP SC , das in Fleischprodukten das
Vorhandensein von BSE-Agens anzeigte, als Marker für den Nachweis von ZNS-Gewebe in
Fleischerzeugnissen nicht geeignet (SCHLOTTERMÜLLER et al. 2002).
2.4.5 Molekularbiologische Methoden zum Nachweis von mRNA
Es sind zur Zeit zwei molekularbiologische Methoden zur Detektion von ZNS-Gewebe
mittels eines mRNA-Nachweises durch RT-PCR bekannt.
Bei der von LANGE et al. (2002) verwendeten Methode wurde die mRNA der Zielproteine
GFAP und MBP nach Extraktion der Gesamt-RNA mittels RT-PCR nachgewiesen und als
Marker für das Vorhandensein von ZNS-Gewebe in verschiedenen bovinen Geweben sowie
Fleischerzeugnissen verwendet. Die Reinheit und Konzentration der Gesamt-RNA wurde
photometrisch bestimmt und mittels der RT-PCR und nachfolgender
Agarosegelelektrophorese eine mögliche DNA-Kontamination kontrolliert. Die verwendeten
Oligonukleotidprimer-Paare waren „GFAP 87 “ und „MBP 51 “. Mit GFAP 87 gelang der
tierartenunabhängige Nachweis von ZNS-Gewebe in Fleischerzeugnissen. Der Nachweis der
mRNA mittels MBP 51 war nur positiv für die Tierarten Rind, Schaf und Ziege gewesen.
Somit eignete sich MBP als Marker zur Detektion von ZNS-Gewebe in Fleischerzeugnissen
(LANGE et al. 2002). Bei der Methode von SEYBOLDT et al. (2003) wird die mRNA des
Zielproteins GFAP nach Extraktion der Gesamt-RNA mittels RT-PCR nachgewiesen und als
Marker für das Vorhandensein von ZNS-Gewebe in Fleisch und Fleischprodukten verwendet.
Die verwendeten Oligonukleotidprimer „GFAPforw“ und „GFAPrev“ binden an
Exonregionen, die das Intron 3 umgeben, und amplifizieren ein 168 bp großes Fragment der
GFAP-mRNA. Somit kann das GFAP-mRNA Fragment von der genomischen DNA des
GFAP beim Rind unterschieden werden, die etwa 957 bp groß ist. Im Anschluss an die RT-
PCR wird mittels des Restriktionsfragment-Längenpolymorphismus mit den
Restriktionsenzymen Alu I, Hae III, Mbo I, Msp I und Sst I eine Tierartendifferenzierung
durchgeführt. Die Untersuchungen des nativen Gewebes des Rindes ergaben bei
zerkleinertem Herz-, Muskel- und Rückenmarkgewebe über den Zeitraum von sieben Tagen
positive 168 bp große GFAP-mRNA Signale. Nach Einwirkung von Hitze (70°C, 20 min.)
waren die Signale von Herz- und Muskelgewebe nicht mehr detektierbar. Mittels der
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