Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Material und Methoden
3.2.4.2 Untersuchungen zur Gewebespezifität an Schafgeweben
3.2.4.2.1 Untersuchung nativer Gewebe
Von Geweben und Organen des Schafes (Kapitel 3.1.1.4) wurde je eine Probe von ca. 1 g mit
einem sauberen Messer entnommen und 100 mg für die RNA-Extraktion abgewogen. Die
verbleibende Probenmenge wurde bei 4°C gelagert. Dieser Versuch wurde nach 24 Stunden
mit den bei 4°C gelagerten Geweben wiederholt. Als Positivkontrolle diente ovines
Rückenmarkgewebe.
3.2.4.2.2 Untersuchung erhitzter Gewebe (75°C, 20 Minuten)
Jeweils 1 g von den verbliebenen 9 g der Proben aus der vorangegangenen Untersuchung der
nativen Gewebe wurden mit einem sauberen Messer abgeschnitten, in ein 15 ml
Zentrifugenröhrchen gegeben, bei 10.000 U/min 1 Minute zentrifugiert und anschließend für
20 Minuten bei 75°C im Wasserbad erhitzt. Von diesen Proben wurden dann je 100 mg für
die RNA-Extraktion abgewogen. Die verbliebenen 8 g der Proben wurden bei 4°C gelagert.
Dieser Versuchsschritt wurde nach 24 Stunden mit dem im Kühlschank gelagerten
Probenmaterial wiederholt. Bei dieser Untersuchung diente ovines Rückenmarkgewebe als
Positivkontrolle. Dieser Versuch wurde insgesamt dreimal durchgeführt.
3.2.4.2.3 Untersuchung erhitzter Gewebe (80°C, 30 Minuten)
Bei diesem Versuch wurden die frisch entnommenen Proben von jeweils 10 g zunächst
separat in einer Moulinette zerkleinert. Die Moulinette wurde vor jeder neuen Probe gründlich
mit heißem Wasser und Seifenlauge gereinigt. In diesem Versuchsansatz wurden ovines
Nieren-, Muskel-, Herz- sowie Rückenmarkgewebe (Kapitel 3.1.1.4) untersucht.
Die mit der Moulinette zerkleinerten Proben wurden wie folgt weiterverarbeitet:
• für die RNA-Extraktion wurden je 100 mg natives Gewebe abgewogen,
• je 1 g von jeder Probe wurde abgewogen und in ein separates 15 ml
Zentrifugenröhrchen gegeben, 1 Minute bei 10000 x g zentrifugiert, für
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