Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Diskussion
Durch die Sequenzierung dieser 399 bp großen GFAP-mRNA Amplifikate, konnte
nachfolgend für die Tierart Schwein / Wildschwein eine dritte RT-PCR mit den Primern
GFAPpork1 und GFAPpork2 entwickelt werden, die einen Sequenzabschnitt der porcinen
GFAP-mRNA amplifiziert, der dem Sequenzabschnitt der bovinen GFAP-mRNA von 168 bp
Größe entspricht. Die Primer GFAPpork1 und GFAPpork2 entsprechen den Primern
GFAPforw und GFAPrev des ersten RT-PCR Systems und sind entsprechend der porcinen
mRNA-Sequenz modifiziert. Mit dieser RT-PCR wurden beim Schwein die Untersuchungen
zur Gewebespezifität und Detektion von porcinem Gehirngewebe in Fleischerzeugnissen
durchgeführt.
Dagegen gelang es nicht mit den hier verwendeten RT-PCR Systemen Amplifikate der
GFAP-mRNA von Huhn und Pute zu erhalten. Der wahrscheinlichste Grund hierfür sind
phylogenetisch bedingte Unterschiede der GFAP-mRNA zwischen der Klasse der Vögel und
der Säugetiere.
5.2 Gewebespezifität und Stabilität der GFAP-mRNA von Rind, Schwein
und Schaf
Vorangegangene Untersuchungen zur Gewebespezifität des GFAP-mRNA Nachweises an
bovinen Geweben haben ergeben, dass neben Gehirn und Rückenmark auch aus nativem
Herzgewebe und Muskulatur ein GFAP-mRNA Nachweis möglich war (SEYBOLDT et al.
2003). Im Gegensatz zu den Geweben des ZNS, konnten die GFAP-mRNA Signale aus
Herzgewebe und Muskulatur durch einen Erhitzungsschritt (75°C, 20 min) vor der RNA-
Extraktion inaktiviert werden. Bovines ZNS-Gewebe konnte jedoch auch in Konzentrationen
von 0,5% in zerkleinertem Fleisch über einen längeren Zeitraum anhand der GFAP-mRNA
sicher nachgewiesen werden (s. Kapitel 2.4.5).
In der hier vorgestellten Dissertation wurden zur Untersuchung der Gewebespezifität der
porcinen GFAP-mRNA die RT-PCR mit den Primern GFAPpork1 und GFAPpork2
verwendet. Die GFAP-mRNA konnte in allen untersuchten nativen Geweben des Schweins
nachgewiesen werden (s. Kapitel 4.1.1.1). Daraufhin wurde untersucht, inwieweit
Erhitzungsprozesse und auch Gefrierprozesse zum Erreichen der Gewebespezifität des
Nachweises porciner GFAP-mRNA beitragen könnten. Bei moderater Erhitzung (75°C für 20
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