Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Diskussion
Temperaturen zur Produktion von Stoffen führen, die GFAP-mRNA abbauen. In diesem
Zusammenhang können auch Enzyme, RNA-Bindungsproteine oder andere Moleküle
entstehen oder zerfallen, die zur Stabilität bzw. Abbau der GFAP-mRNA beitragen. Eine
weitere mögliche Ursache ist der Zerfall der GFAP-mRNA in kleinere Fragmente, die von der
verwendeten RT-PCR nicht mehr erfasst werden können. RAM et al. (1996) berichten in ihrer
Arbeit von dem Zerfall der DNA des Cytochrom b Gens in Fragmente kleiner als 123 bp, der
durch den Erhitzungsprozess bei der Konservenherstellung verursacht wurde. Somit kann es
durchaus möglich sein, dass auch mRNA durch den Erhitzungsprozess bei der
Konservenherstellung fragmentiert wird.
Somit ist ein sicherer Nachweis der GFAP-mRNA über einen längeren Zeitraum mit der hier
angewandten Methode in Vollkonserven nicht möglich.
5.3.4 Brühwursterzeugnisse aus Rindfleisch mit bovinem PNS-Gewebe
Der Gehalt von GFAP in peripheren Nervengewebe (PNS) ist mit 13,5 – 51 ng/mg im
Vergleich zu Muskelgewebe (2,8 ng/mg GFAP-Gehalt) recht hoch (SCHMIDT et al. 1999)
und könnte möglicherweise als falsch positives Signal bei der Detektion von Gehirngewebe in
Fleisch und Fleischerzeugnissen auftreten. In Bezug auf den Nachweis des GFAP sind
Untersuchungen zum Einfluss von PNS auf die Identifizierung von ZNS-Gewebe noch nicht
durchgeführt worden. In den bisher veröffentlichten Untersuchungen wird davon
ausgegangen, dass das PNS-Gewebe im GFAP-ELISA (SCHMIDT et al. 2001) sowie im
NSE-Westernblot (LÜCKER et al. 1998, 1999, 2000a,) erst bei sehr hoher Beimengung von
25 % bis 50 % in Fleischerzeugnissen ein falsch positives Ergebnis verursachen könnte
(LÜCKER u. SCHLOTTERMÜLLER 2001a). Bei einem immunhistologischen Nachweis
von ZNS-Gewebe konnte mit einem Antikörper gegen das Neurofilament auch PNS-Gewebe
detektiert werden (AUPPERLE et al. 2002; LÜCKER et al. 2002a).
In den eigenen Untersuchungen sollte aufgezeigt werden, inwieweit der Nachweis boviner
GFAP-mRNA durch Beimengung von PNS-Gewebe beeinflusst wird. Um festzustellen, ab
welcher Konzentration die Beimengung von PNS in Fleisch und Fleischerzeugnissen beim
Rind einen falsch positiven Nachweis des ZNS-Gewebes ergeben kann, wurde natives PNS-
Gewebe, erhitztes PNS-Gewebe sowie Brühwursterzeugnisse aus Rindfleisch untersucht, die
mit bovinen PNS-Gewebe in den Konzentrationsabstufungen 0 %, 0,25 %, 0,5 %, 1 % und 5
% dotiert waren und bei 75°C im Wasserbad erhitzt wurden (s. Kapitel 4.2.1.6). Lediglich die
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