Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

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Ergebnisse Marker Schwein Wildschwein Rind Schaf Pferd Damwild Rehwild Rotwild Huhn Pute Marker 168 bp nativ 168 bp Hae III 168 bp Alu I 168 bp Msc I 168 bp Msp I 168 bp Mbo I 168 bp Sst I Abb. 9: RFLP des 168 bp großen Fragments der GFAP-mRNA Beispiel einer Auswertung der RT-PCR mit den Primen GFAPforw und GFAPrev mittels Agarosegelelektrophorese (3,75 %iges Agarosegel); Marker puC 19/Msp I (Bandengrößen von oben nach unten: 489/501 bp, 404 bp, 331 bp, 242 bp, 190 bp, 147 bp,110/111 bp) Restriktionsenzyme: Hae III, Alu I, Msc I, Msp I, MboI, Sst I 100
Diskussion 5 Diskussion 5.1 Saures Gliafaserprotein (GFAP) als Marker für ZNS-Gewebe in Fleischerzeugnissen Das saure Gliafaserprotien (GFAP) gehört zu den Typ III Intermediärfilamentproteinen (IF), die im Zentrum eine hoch konservierte α-Helix Struktur aufweisen, die von nicht helicalen Kopf- und Schwanz-Domänen flankiert werden (BRENNER 1994; FUCHS u. WEBER 1994; NIELSEN et al. 2002). GFAP zählt zu den wichtigsten Strukturproteinen der reifen Astrogliazellen (FUCHS u. CLEVELAND 1998). Das GFAP kommt somit hauptsächlich in Geweben des zentralen (ZNS) und peripheren Nervensystems (PNS) vor (ENG et al. 2000). Im ZNS-Gewebe sind hohe Gehalte an GFAP enthalten. Das Rückenmarkgewebe enthält mit 55000-220000 ng/mg, gemessen im colorimetrischen ELISA, die höchsten Konzentrationen an GFAP (Schmidt et al. 1999). Das Gehirngewebe enthält mit 9000-55000 ng/mg ein Drittel und die peripheren Nerven, wie der Nervus ischiadicus, mit 13,5-51 ng/mg weniger als 1 % des GFAP-Gehaltes des Rückenmarks (Schmidt et al. 2001). Aufgrund des hauptsächlich gewebespezifischen Auftretens des GFAP, kann es als Marker zum Nachweis von ZNS-Gewebe in Fleisch und Fleischerzeugnissen genutzt werden. Zur Zeit existieren folgende Nachweisverfahren zum Nachweis von GFAP in mit Gehirngewebe dotierten Fleischerzeugnissen: (a) immunchemische Nachweisverfahren, zu denen der GFAP- Westernblot (LÜCKER et al. 2000; OVERHOFF et al. 2002) und der Immunosorbent-F- ELISA (SCHMIDT et al. 1999a, 2001) gehören und (b) immunhistochemische Nachweisverfahren mit Antikörpern gegen GFAP (LOVE et al. 2000; TERSTEEG et al. 2002; AUPERLE et al. 2002; LÜCKER et al. 2002a). 5.1.1 GFAP-mRNA als Marker für ZNS-Gewebe in Fleischerzeugnissen Die Regulation der Stabilität der mRNA in Säugetierzellen ist sehr komplex (ROSS 1995; GUHANIYOGI u. BREWER 2001) und die Halbwertszeiten reichen wenigen Minuten bis zu über 24 Stunden. Stabile mRNAs kodieren meist für reichlich vorhandene und hochkonservierte Proteine (ROSS 1995) oder stammen aus Geweben, bei denen die Translation 101
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