Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Diskussion
min bzw. 80°C für 30 min) wurden beim Schwein alle GFAP-mRNA Signale der beprobten
Gewebe inaktiviert, außer von Muskel-, Herz- und ZNS-Gewebe, die auch noch bei moderater
Erhitzung (80°C für 30 min) nach vorangegangenem 24 stündigen Gefrierprozess
nachweisbar waren (s. Kapitel 4.1.1.2, 4.1.1.3, 4.1.1.5). Durch starke Hitzeeinwirkung (95°C
für 60 min) konnten die GFAP-mRNA Signale aus Herz- und Muskelgewebe in Abhängigkeit
von der vorhergehenden Lagerdauer bei 4°C deutlich reduziert werden (s. Kapitel 4.1.1.4).
Bei der Untersuchung von Geweben des peripheren Nervensystems (PNS) des Schweins
konnten, im Gegensatz zu den Untersuchungen beim Rind (s. Kapitel 4.2.1.6), aus moderat
erhitztem (80°C, 60 Minuten) PNS-Gewebe noch GFAP-mRNA Signale detektiert werden (s.
Kapitel 4.1.1.6).
Bei der Untersuchung eines mit porcinem Gehirngewebe dotierten
Schweinefleischerzeugnisses (80°C, 65 min) waren in vier von 18 durchgeführten Versuchen
auch solche Proben positiv für GFAP-mRNA, die kein porcines Gehirngewebe enthielten (s.
Kapitel 4.2.2.2). Somit wurde der Nachweis porciner GFAP-mRNA als nicht ausreichend
spezifisch für ZNS-Gewebe befunden. Insbesondere kann nicht sicher ausgeschlossen
werden, dass bei der Untersuchung von Fleischerzeugnissen die mit schlachtfrischer
Muskulatur hergestellt wurden, falsch positive Ergebnisse auftreten.
Für die Untersuchungen zur Gewebespezifität der ovinen GFAP-mRNA wurde die RT-PCR
mit den Primern GFAPforw und GFAPrev verwendet, da die Sequenz der ovinen GFAPmRNA
im Bereich der Primer nicht von der bovinen Sequenz abweicht (s. Kapitel 4.3.). In
nativem Gewebe vom Schaf war die GFAP-mRNA in Nieren-, Leber-, Herz-, Muskel- und
ZNS-Gewebe nachweisbar (s. Kapitel 4.1.2.1). Auch für die Tierart Schaf wurde daraufhin
untersucht, inwieweit Erhitzungsprozesse und Gefrierprozesse zum Erreichen der
Gewebespezifität des Nachweises der GFAP-mRNA beitragen. Mäßige Erhitzung (75°C für
20 min bzw. 80°C für 30 min) reduzierte die Nachweisbarkeit GFAP-mRNA in Nieren- und
Lebergewebe so sehr, dass kein GFAP-mRNA Signal detektiert wurde. In Muskel-, Herz- und
ZNS-Gewebe war unter diesen Erhitzungsbedingungen der Nachweis der GFAP-mRNA
jedoch weiterhin möglich (s. Kapitel 4.1.2.2, 4.1.2.3). Bei moderater Erhitzung (80°C für 30
min.) nach vorangegangenem 24 stündigen Gefrierprozess wurde lediglich das GFAP-mRNA
Signal des ovinen Herzgewebes so stark reduziert, dass kein GFAP-mRNA Signal mehr
detektiert wurde (s. Kapitel 4.1.2.5). Auch bei starker Erhitzung (95°C, 60 min) war die
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