Spezies- und gewebespezifischer Nachweis von bovinem ZNS ...

Ergebnisse
muss auch beim Schaf mit durch PNS-Gewebe verursachten falsch positiven GFAP-mRNA-
Signalen bei der Untersuchung von Fleischerzeugnissen gerechnet werden.
4.2 Fleischerzeugnisse, die mit unterschiedlichen Konzentrationen an
Gehirngewebe dotiert wurden
4.2.1 Fleischerzeugnisse dotiert mit Rindergehirngewebe
Die selbst hergestellten Fleischerzeugnisse (s. Kapitel 3.2.1.1) wurden mit Rindergehirn
(s. Kapitel 3.1.1.1) in folgenden Konzentrationen dotiert: 0 %, 0,25 %, 0,5 %, 1 % und 5 %.
Das Fleischerzeugnis ohne Gehirn diente als Negativkontrolle, bei den Versuchen
mitgeführtes reines Gehirngewebe als Positivkontrolle. Bei den Versuchen mit Brühwurst
(75°C Gartemperatur), Leberwurst und den Vollkonserven diente das Fleischerzeugnis mit
5 % Gehirngewebe-Beimengung als Positivkontrolle. Bei Vollkonserven wurde eine RNA-
Probe aus reinem Gehirngewebe als Positivkontrolle für die RT-PCR eingesetzt. Bei allen
Fleischerzeugnissen, die mit Rindergehirn dotiert wurden, wurde die PCR mit den Primern
GFAPforw und GFAPrev eingesetzt (s.a. Kapitel 3.2.6.1).
4.2.1.1 Nachweis von GFAP-mRNA aus mit Rindergehirn dotierten Brühwürsten
(Gartemperatur 75°C)
Die Brühwursterzeugnisse wurden bei 75°C im Wasserbad für 65 Minuten erhitzt (s. Kapitel
3.2.5.1.1). Die mit dem Temperaturmessfühler ermittelte Kurve der Kerntemperatur hatte
ergeben, dass im Kern des Brätes eine Höchsttemperatur von 68°C für den Zeitraum von
mindestens 15 Minuten erreicht werden konnte.
Die mittels der RT-PCR und nachfolgender Agarosegelelektrophorese detektierten Banden
des 168 bp großen GFAP-mRNA-Amplifikats sind in der nachfolgenden Tabelle 27
dargestellt. Hierbei steht ein „+“ für den Nachweis des 168 bp großen GFAP-mRNA-
Amplifikats durch RT-PCR, und ein „−“ für ein negatives Ergebnis der RT-PCR.
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