Diagnosi prenatale ed ecografia in gravidanza - Age.Na.S.

Capitolo 8 • Tecniche genetiche in diagnosi prenatale 175
Sulla base dell’esperienza laboratoristica l’esame diretto
della villocentesi può essere sostituito dallo studio delle più
comuni aneuploidie cromosomiche mediante la tecnica della
QFPCR. Tale tecnica deve essere utilizzata contestualmente
all’esclusione di contaminazione materna nel campione da
esaminare.
Quando viene eseguito l’esame del cariotipo su linfociti
fetali?
L’esame del cariotipo su sangue fetale viene eseguito solo in
presenza di particolari condizioni come: evidenze ecografiche
tardive di anomalie morfologiche fetali riconducibili ad anomalie
cromosomiche o genetiche; conferma di un mosaicismo
cromosomico riscontrato su metafasi da villi coriali o da liquido
amniotico. L’esame deve essere effettuato almeno su 16 metafasi
3 delle quali devono essere usate per la ricostruzione del cariotipo
ed almeno 6 per il riconoscimento degli omologhi. Il livello di
risoluzione deve essere funzionale alla diagnosi da effettuare.
Nei casi di mosaicismo si può estendere l’esame fino a 100
metafasi e può essere utile, ai fini diagnostici, l’integrazione con
indagine FISH con sonda cromosoma specifica.
Con quale metodologia è possibile attuare una conferma
genetica dopo un esito positivo determinato mediante
citogenetica classica?
La tecnica di Ibridazione in Situ a Fluorescenza (FISH) consente
di verificare e confermare casi di mosaicismo cromosomico,
di identificare riarrangiamenti subcromosomici al di sotto del
potere di risoluzione delle tecniche di citogenetica tradizionale e
di contribuire alla caratterizzazione di Extra Structural Abnormal
Cromosomes (ESACs). Le sonde che si possono usare per fini
diagnostici sono diverse: sonde alfoidi per la caratterizzazione
degli ESACs, utilizzate anche per la valutazione di bassi
IIB