Raíces y Tubérculos Andinos - Monitoreo y Evaluación de Impacto

Concepto de caracterización de germoplasmaLa caracterización es la toma de datos mayormentecualitativos, altamente heredables para describir yasí diferenciar las muestras o entradas de unacolección de germoplasma; se toman durante lamultiplicación o refrescamiento de las accesiones(Castillo et al., 1991).Para la caracterización de germoplasma de RTAs, elDENAREF ha empleado diferentes metodologías paraeste propósito durante todo el período de ejecucióndel proyecto.Caracterización morfo-agronómica en campo. Losensayos de caracterización de RTAs se instalaron en laEstación Experimental Santa Catalina de INIAP. El númerode descriptores varió para cada especie; en algunoscasos, se utilizaron descriptores previamente definidosa nivel internacional, o se elaboraron listas preliminaresFigura 2.12. Tuberización in vitro de melloco entrada ECU-909. Estaentrada corresponde al morfotipo amarillo alargado con manchasrosadas (provincia de Loja), en el que se obtuvo un rendimiento de 6 gpor unidad experimental.de descriptores que fueron posteriormente afinadasdurante el proceso de toma de datos. Para el registro dedatos, durante un ciclo del cultivo, cada descriptor fueaplicado en 10 plantas por entrada.Caracterización isoenzimática. La detección deisoenzimas mediante electroforesis comprende lapreparación y el almacenamiento de extractos,preparación de geles de almidón, la corridaelectroforética, el proceso mismo de detección deisoenzimas mediante técnicas de tinción histoquímicasy el análisis isoenzimático, en el cual se definen lospatrones observados para cada isoenzima. Finalmente,se identifica el patrón que presenta cada accesión y secodifica en una base de datos.Caracterización molecular. Se empleó la técnicaRAPDs (Random Amplified Polymorphism DNA -Polimorfismo de ADN amplificado al azar), que es unavariante de la técnica de amplificación de ADN (PCR),debido a que no requiere un conocimiento previo delgenoma de estudio y es de relativamente fácilimplementación, en comparación con otras técnicasmoleculares. Comprende una etapa de extracción deADN genómico, para lo cual es necesario determinar elprotocolo más eficiente respecto a calidad y cantidadde ADN obtenido. Posteriormente, se realiza unscreening con fines de detectar primers (secuencias denucleótidos cortas sintetizadas artificialmente ydisponibles en el mercado), útiles para la detección depolimorfismo en cada una de las colecciones. Una vezidentificados estos primers, se amplifican en toda lacolección. Finalmente, cada polimorfismo constituye unavariable que es registrada por ausencia o presencia encada entrada y se construye una base de datos.Análisis estadístico. Datos morfológicos: Los datosse ingresaron en una matriz con formato EXCEL y laestimación del parecido taxonómico de los caracteresmorfológicos se realizó mediante el coeficiente dedistancia de Gower (1967), del software SAS, versión6.12 (SAS Institute, 1990). La estructura taxonómica delas accesiones se analizó por medio del agrupamientojerárquico de Ward (1963). La elección del número degrupos de accesiones se hizo con los criterios de PseudoF y Pseudo t2, y se utilizó el procedimiento CLUSTER. Ladeterminación del valor discriminante entre grupos paracaracteres cuantitativos se determinó a través del índice“D” de Engels (1983), al utilizar las medias de los gruposen las comparaciones múltiples de Duncan (1975). Paralos caracteres cualitativos, el valor discriminante paraseparar grupos se estimó con base en el análisis defrecuencias y las estadísticas de Cramer (V) (Kendall yStuart, 1979), contingencia (P) y Chi cuadrado (X2)(Cochran, 1954).Manejo y Conservación de RTAs47