Rapporto finale - Metodologie di Monitoraggio dell ... - Momar

L’obiettivo del presente studio è quello di verificare la fattibilità dell’esecuzione
di saggi biologici per acque marino-costiere nelle condizioni in situ. Al fine di
raggiungere questo obbiettivo, sono state eseguite contemporaneamente prove
in laboratorio, su campioni d’acqua prelevati in campo lungo il litorale
livornese, e prove in situ, nelle medesime stazioni di prelievo, ottimizzando la
struttura dei sistemi e la strategia di campionamento. In entrambe le situazioni
è stato condotto il saggio di embriotossicità con il riccio di mare Paracentrotus
lividus.
Saggi in laboratorio
La metodologia per quanto riguarda il saggio di laboratorio è stata sviluppata
in accordo con le procedure standard descritte in ASTM (2004), ICES (1997),
USEPA (1994, 1995, 2000) e dati di letteratura: Arizzi Novelli (2002), Volpi
Ghirardini et al. (2005), Lera et al. (2006).
Il saggio di embriotossicità consiste nell’esporre una soluzione di uova
fecondate a una matrice acquosa al fine di determinare una diminuzione nella
percentuale di plutei normoformati a 4 braccia dopo un tempo di 48/72 ore a
18°C±1.
Recupero dei gameti
L’emissione dei gameti è stata provocata tramite l’iniezione di 1 ml di KCl
attraverso la membrana peristomale e il successivo scuotimento meccanico
dell’animale per alcuni secondi. Tale trattamento stimola ulteriormente
l’emissione e aiuta a distribuire omogeneamente il KCl sulle gonadi. Sono stati
individuati almeno 3 maschi e 3 femmine, i cui gameti sono stati raccolti
separatamente. In particolare le uova sono state recuperate utilizzando dei
beaker da 50 ml riempiti d’acqua di mare filtrata e ponendo ciascuna femmina
al di sopra del beaker, con il poro genitale rivolto verso l’acqua. In seguito le
uova sono state selezionate per la loro qualità, tramite controlli al microscopio,
scartando le uova vacuolate, irregolari o troppo piccole. La selezione viene
facilitata eseguendo 3 lavaggi, per poi porre le uova all’interno di beaker da 1 l
con acqua di mare filtrata.
Per quanto riguarda la raccolta dello sperma questa è stata effettuata “a secco”,
vale a dire nelle stesse condizioni in cui usciva dal poro genitale (evitando
l’utilizzo di alcuna soluzione acquosa), tramite una pipetta Pasteur, e
conservato in una eppendorf.
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