TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

Material und Methoden
zu bestimmenden Dioxine bzw- dl-PCB quantifizieren zu können und mögliche
Verluste, die eventuell im Rahmen der Probenverarbeitung (v. a. bei der
Fettextraktion) auftreten konnten, berücksichtigen zu können. Die Extraktion des im
Futtermittel enthaltenen Fettes wurde mithilfe eines ASE-Gerätes (Accerelated
Solvent Extraction, Thermo Scientific Dionex) durchgeführt. Dieses Gerät versetzte
das Probenmaterial mit einem Gemisch aus Toluol und Ethanol (Verhältnis 70 : 30)
und stellte unter Hitze (120 °C) unter einem konstantem Druck (ca. 10 MPa) eine
Extraktionslösung her. Diese wurde in einen Rundkolben überführt und an einem
Rotationsverdampfer eingeengt. Als weiterer Schritt schloss sich nun die
Matrixzerstörung an. Hierzu wurde die Probenlösung auf eine mit n-Hexan
vorgespülte Mischphasen-Chromatographiesäule gegeben und mit n-Hexan eluiert.
Mithilfe von einem Syncoregerät und mittels Einengung unter N 2 -Einstrom erfolgte
eine Umarbeitung des Eluats auf n-Hexan. Die Aufreinigung bzw. Trennung der
PCB-Fraktion und PCDD/F-Fraktion im Eluat erfolgte mithilfe einer Florisilsäule. Die
PCDD/F-Fraktion wurde dann mithilfe säulenchromatographischer Schritte –
zunächst unter Verwendung einer Silbernitrat/Kieselgel-Säule, danach mittels einer
Aluminiumsäule – aufgereinigt. Das PCB-Eluat wurde mithilfe einer HPLC (High
Performance Liquid Chromatography) in 3 verschiedene Fraktionen aufgetrennt: In
einer Fraktion befanden sich die mono-ortho-PCB, in einer weiteren die non-ortho-
PCB. Die dritte Fraktion, welche die di-ortho-PCB enthielt, wurde verworfen, da die
sogenannten „Indikator-PCB“ nicht mit bestimmt wurden. Sowohl dem PCDD/F- als
auch dem dl-PCB-Eluat wurden dann vor der Messung noch einmal markierte
Standards zugesetzt. Diesmal handelte es sich um eine interne Standardlösung, die
dazu diente, die Wiederfindungsraten der Surrogate-Standards bestimmen zu
können. Es wurde eine Wiederfindungsrate von 60 – 120 % festgelegt. Wurde diese
bei den einzelnen Kongeneren nicht erzielt, erfolgte eine Wiederholung der Messung.
3.6.2.3 Proben von Tieren (Kolostrum, Milch, Muskulatur, Leber)
Auch die Dioxinanalytik (PCDD/F + dl-PCB) in den Kolostrum-, Milch-, Muskulaturund
Leberproben erfolgte mittels Gaschromatographie/Massenspektrometrie. Die
Methodik der Probenaufarbeitung war aber zunächst nicht identisch mit der oben
Beschriebenen.
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