Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 96
Die Probenahme selbst erfolgt über die Diffusion niedermolekularer Substanzen aus
der Fermentationsbrühe durch die Membran in einen sogenannten Akzeptor-Pufferstrom,
der durch den Kanal der Dialyseeinheit in das FIA-System gepumpt wird
(Mohns, 1996). Da Diffusionsprozesse in der Regel langsam ablaufen, sind geringe
Fließgeschwindigkeiten bzw. ein Stoppen des Akzeptorstroms nötig, um eine ausreichend
hohe Analytkonzentration in diesem zu gewährleisten. Dem hierdurch entstehenden
Nachteil einer Zeitverzögerung zwischen Probenahme und Detektion
steht die positive Eigenschaft gegenüber, daß über die Variation der Fließgeschwindigkeit
bzw. der Stoppzeit die Probe wenn nötig automatisch verdünnt werden
kann.
Zur Simulation einer on-line Überwachung wurde ein Dialysemodul (Trace Biotech
AG, Braunschweig) mit einer Polypropylenmembran, die einen cut-off von 10 kDa
besaß, in den Probenloop des Injektionventils integriert und in die Probenlösung ge-
taucht. Beim Schalten des Ventils auf die Position Füllen wurde der Fließweg hinter
der Membran mit dem Akzeptorstrom gefüllt und anschließend für 5 min angehalten
(geringere Stoppzeiten führten zu keinen auswertbaren Ergebnissen), um die
Diffusion des Xanthins zu erlauben. Nach dieser Stoppzeit und Umschalten auf die
Ventilposition Injektion wurde das in den Akzeptor hineindiffundierte Probensegment
über den XOD- bzw. BSA-Reaktor transportiert und an der Platin-Dickschicht-
elektrode analysiert.
Der Vergleich beider Probenahmesysteme zeigte für die Analyse in Clark & Lubs-
Puffer pH 8 angesetzter Xanthin-Standards bei Verwendung des Dialysemoduls
einen deutlich vergrößerten linearen Bereich (0 bis 500 µM) mit einer Empfindlichkeit
von 1,55 µA/mM (Abb. 41). Mit Hilfe des Injektionsventils wurde zwar eine höhere
Sensitivität erreicht (2,16 µA/mM), jedoch lediglich in einem linearen Meßbereich, der
sich von 0 bis 100 µM erstreckte.