Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 104
3.3.1.2 Separations-Spannung
Bei der elektrophoretischen Trennung einer Probe in einer Kapillare zählt die
Höhe der angelegten Spannung zu einem der wichtigsten Parameter. Eine Erhöhung
der Spannung kann viele Effekte mit sich ziehen, so wird beispielsweise die
Wanderungsgeschwindigkeit der Probe und die elektroosmotische Fließgeschwindigkeit
gesteigert und die Gesamtanalysendauer verkürzt. Darüber hinaus kann der
Peak steiler werden und sich dadurch die Auflösung verbessern. Jedoch ist eine
Potentialerhöhung auch mit einigen Nachteilen verbunden, z. B. einer größeren Produktion
an Joulescher Wärme, die zur Aufrechterhaltung der Trennqualität effektiv
abgeführt werden muß. Kann dies nicht gewährleistet werden, erwärmt sich die
Kapillare, was zu einer verminderten Viskosität der Lösung führt. Diese wiederum bewirkt
eine Erhöhung der elektroosmotischen Fließgeschwindigkeit, eine größere
Ionen-Mobilität und Analyt-Diffusion, was schließlich in einer Bandenverbreiterung
enden kann (Oda und Landers, 1997). Daher muß die Separations-Spannung sehr
sorgfältig ausgewählt werden, um solche die Trennung negativ beeinflussende
Effekte zu vermeiden.
Zur elektrophoretischen Trennung von Xanthin wurde ein in H2O dest. angesetzter
Standard (2 mg/l) über Druck (4 s) am anodischen Ende der Kapillare injiziert und
der Einfluß der Höhe der angelegten Spannung auf die Trennleistung untersucht. In
Abb. 47 sind die Elektropherogramme dargestellt, die mit Spannungen von 15, 10
bzw. 7,5 kV und10 mM CE-Puffer erhalten wurden.
Absorption [mAU]
600
500
400
300
200
100
0
-100
Trennung von 2 mg/l Xanthin
15 kV
10 kV
7,5 kV
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5
Migrationszeit [min]
Abb. 47: Einfluß der Hochspannung; 2mg/l Xanthin; 10 mM CE-Puffer pH 9,2; Detektion: 280 nm