Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

2. Material und Methoden 47
Möglichkeit Analyte, die die nötigen physikalischen oder chemischen Eigenschaften
nicht besitzen, indirekt nachzuweisen, indem dem Puffer eine leicht zu detektierende
Spezies zugesetzt wird, die ein konstantes hohes Grundsignal erzeugt. Das Prinzip
der indirekten Detektion basiert auf einem Verdrängungsmechanismus, bei dem
unter Einhaltung der Elektroneutralität ein Teil der signalgebenden Moleküle gegen
den eigentlichen Anayten innerhalb der Probenzone ausgetauscht wird. Durch diesen
Prozeß wird das Grundsignal verringert, was sich in der Form eines negativen Peaks
beobachten läßt (Abb. 12).
helle
Pufferzone
dunkle
Probenzone
helle
Pufferzone
Abb. 12: Schematische Darstellung des Prinzips der indirekten Detektion
Für die durchgeführten Untersuchungen zur indirekten LIF-Detektion von Xanthin
wurde dem CE-Puffer Fluorescein als signalerzeugende Substanz zugesetzt, deren
Absorptionsmaximum von 492 nm sehr gut mit der Anregungswellenlänge eines
Argon-Ionenlasers (488 nm) übereinstimmt. Durch die mit einer Wellenlänge von 520
nm emittierte Fluoreszenz wurde ein kontinuierliches Grundsignal erzeugt, das bei
der Injektion und anschließendenTrennung von Xanthin herabgesetzt wurde.
2.2.10 Mikrosysteme
Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurden integrierte mikrofluide Systeme
verwendet, in denen ausschließlich elektroosmotische Effekte zum Flüssigkeitstransport
ausgenutzt wurden. Die Herstellung dieser Chips beschränkte sich aus diesem
Grund auf die Erzeugung eines Kapillarnetzwerks in einem planaren Glassubstrat.
Signal-Level
Zeit