Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 129
Fluoreszenz [mAU]
10000
9000
8000
7000
6000
5000
4000
5 s
15 s
30 s
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Migrationszeit [s]
Abb. 60: Einfluß der Injektionsdauer auf die Xanthin-Trennung; 2 mM Xanthin; 1 µM Fluorescein; 0,5
kV Injektionsspannung, 7 kV Separationsspannung
Da Xanthin als Anion eine elektrophoretische Mobilität aufwies, die dem elektroosmotischen
Fluß entgegengesetzt war, konnten über eine Erweiterung der Injektionsdauer
von 5 auf 15 s mehr Analytmoleküle über Elektroosmose in den
doppel-T-Bereich transportiert werden, was sich in einer Erhöhung des Peaks um
84% bemerkbar machte. Sowohl der Xanthin- als auch der benachbarte Systempeak
verbreiterten sich aufgrund der verlängerten Injektionsdauer, jedoch stellte sich
weiterhin noch eine Grundlinienauflösung beider Signale ein. Wurde die Injektion
nochmals um 15 s auf 30 s erweitert, kam es zu einer deutlichen Überladung des
Schnittpunktes, was sich darin äußerte, daß beide Peaks so stark verbreitert wurden
und teilweise überlappten, so daß keine Grundlinienauflössung mehr stattfinden
konnte. Auch stieg die Peakhöhe nicht weiter an, sondern nahm aufgrund der Verbreiterung
um 18,8% ab. Diese Verbreiterung hatte letztendlich auch Auswirkungen
auf die Migrationszeit. Über die zur Auswertung der Elektropherogramme verwendete
Software (MicrocalOrigin Version 5.0, Microcal Software Inc.,
Northhampton, USA) wurden die Migrationszeiten unter Annahme einer Gauß´schen
Peakform aus dem Zentrum des Signals ermittelt. Aufgrund der zunehmenden Ausdehnung
der Signale mit ansteigender Injektionsdauer verschob sich dieses Zentrum
immer weiter, woraus längere Migrationszeiten resultierten.