Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

2. Material und Methoden 23
2.1.2 Enzyme
Glucose-Oxidase a. Aspergillus niger, EC 1.1.3.4 (200 U/mg), Boehringer Mannheim
Hexokinase aus Bäckerhefe, Typ III, EC 2.7.1.1 (20 U/mg), Sigma, Deisenhofen
Xanthin-Oxidase aus Kuhmilch, EC 1.1.3.22 (0,1 U/mg), Boehringer Mannheim
Peroxidase aus Meerrettich Typ VI-A, EC 1.11.1.7 (1000 U/mg), Sigma, Deisenhofen
2.1.3 Verwendete Puffer
Clark & Lubs-Puffer (C&L): Zugabe eines individuellen Volumens von 0,1 M
(50 mM) NaOH zu 500 ml einer 0,1 M Borsäure/KCl-Lösung
bis zum Erreichen des erforderlichen pH-Wertes
und Auffüllen auf 1000 ml Endvolumen mit H2O
dest.
Kaliumphosphat-Puffer (KPP): Mischen von 0,1 M K2HPO4 und 0,1 M KH2PO4 bis
(0,1 M) zur Einstellung des gewünschten pH-Wertes
CE-Puffer (10 mM): Mischen von 10 mM Borsäure und 10 mM NaHCO3
bis zur Einstellung von pH 9,2
Borat-Puffer (50 mM): 0,05 M Borsäure mit 1 M NaOH auf pH 9 eingestellt
Acetat-Puffer (50 mM): 0,05 M Natriumacetat mit 1 M Citronensäure auf pH
2.1.4 Glas-Beads
5,5 eingestellt
Controlled pore glass (CPG) Fluka, Deisenhofen
Nucleosil 1000-5 Silica Beads Macherey-Nagel, Düren
2.1.5 Geräte
2.1.5.1 Fließinjektionssystem
Peristaltische Pumpen: Meredos, Nörten Hardenberg
Injektionsventil V 100: Perstorp Analytik GmbH, Rodgau