Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 142
färbung stand in direktem Zusammenhang mit der verminderten Emission, da es sich
hierbei um ein bei hohen Luminolkonzentrationen gebildetes Produkt handelte, das
die immobilisierte POD deaktivierte (Ikariyama et al., 1980). Im POCRE-Chip wurde
bei dieser Luminol-Konzentration keine CL-Abnahme ermittelt, da durch den kontinuierlichen
Fließmodus stets frische POD-Beads als Katalysator zur Verfügung
standen und eine durch Luminol hervorgerufene Deaktivierung bei dieser Betriebsweise
vernachlässigbar klein blieb. Eine Verdünnung der Luminol- und H2O2-Lösung
um den Faktor 10 bedeutete eine Verbesserung der Signalstabilität, indem nach vier
Messungen noch 71,3% der Ausgangsintensität nachgewiesen werden konnten.
Sehr positiv auf das Signalverhalten zwischen einzelnen Messungen wirkte sich ein
zusätzlicher Pufferspülschritt aus, der das Enzymbett praktisch vollständig regenerierte
und der Luminol-Deaktivierung effektiv entgegenwirkte. Der Signalhöhenunterschied
zwischen der ersten und dritten Messung blieb dann im Bereich der
Meßgenauigkeit des Photomultipliers, so daß kein Sensitivitätsverlust auftrat.
CL-Signal [mAU]
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
10 mM Luminol; 1 mM H 2 O 2
1 mM Luminol; 100 µM H 2 O 2
1 mM Luminol; 100 µM H 2 O 2 + Puffer-Spülschritt zwischen Messungen
1 2 3 4
Messung 1
Messung 2
Messung 3 Messung 4
Abb. 68: Einfluß der Luminol- und H2O2-Konzentration auf das CL-Signal bei Einsatz eines PODmikro-Reaktors
Unter Berücksichtigung dieser Ergebnisse wurden nachfolgende Experimente mit
einer Kombination von 1 mM Luminol/100 µM H2O2 sowie Pufferspülschritten
zwischen den einzelnen Messungen durchgeführt.