Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 58
wendung von C&L-Puffer im Vergleich zum KPP-Puffer aktiver, so daß größere
Ströme registriert wurden.
Alle nachfolgenden Untersuchungen zur amperometrischen ATP-Bestimmung mit
Hilfe des Glucose-Oxidase/Hexokinase-Systems wurden mit 50 mM Clark & Lubs/10
mM MgCl2 pH 8 als Carrier-Puffer durchgeführt. Die Salzkonzentration von 10 mM
wurde dabei aus zwei Gründen gewählt: erstens blieb so gewährleistet, daß das
Elektrodensignal nicht durch kleine Ungenauigkeiten bei der eingewogenen Mg 2+ -
Menge beeinträchtigt wurde und zweitens hat sich diese Konzentration des Cosubstrats
auch als optimal für die enzymatische ATP-Umsetzung durch die
Hexokinase erwiesen (Compagnone und Guilbault, 1997).
3.1.2 Verhältnis der immobilisierten Enzymmengen
Enzymsensoren zur amperometrischen ATP-Bestimmung wurden durch Co-
Immobilisierung der beiden beteiligten Enzyme über Glutardialdehyd auf einer Platin-
Einzelelektrode hergestellt. Zur Optimierung des Verhältnisses mit dem die
Hexokinase und Glucose-Oxidase immobilisiert werden mußten, um einen möglichst
sensitiven ATP-Biosensor zu erhalten, wurden 7 µl HK mit einer Gesamtaktivität von
16 Units mit jeweils 1,5 µl verschieden konzentrierter GOD-Lösungen verrührt und
wie unter 2.2.3.1 beschrieben auf die Oberfläche einer silanisierten Pt-Elektrode
gebunden. In Tabelle 10 sind die eingesetzten GOD-Aktivitäten sowie die daraus
resultierenden theoretischen Aktivitätsverhältnisse in der Enzymmembran der
einzelnen Sensoren zusammengefaßt.
Elektroden-Nr. Aktivität der GOD-
Lösung
Aktivitäts-Verhältnis
HK/GOD
1 0,45 Units 35,6
2 0,9 Units 17,8
3 2,25 Units 7,1
4 9 Units 1,78
5 45 Units 0,36
Tab. 10: Aktivitätsverhältnis der co-immobilisierten Hexokinase und Glucose-Oxidase