Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

4. Zusammenfassung und Diskussion 163
körper handelte (Mangru und Harrison, 1998). Das erzielte Detektionslimit war mit
einem LIF-Nachweis vergleichbar, so daß im allgemeinen durch eine on-Chip CL-
Detektion kein Sensitivitätsverlust auftritt.
4.4.2 Integrierter Enzymreaktor
Über den RCC-Chip wurde gewährleistet, daß die Enzymbeads im Kanalsystem
zurückgehalten werden konnten und damit ein wiederverwertbares System entstand.
Wie die Experimente im POCRE-Chip bereits gezeigt hatten, migrierten die Beads im
elektrischen Feld und konnten daher innerhalb von etwa 10 min elektrokinetisch in
die 330 pl-Kavität gepackt werden. Zur Optimierung der reinen CL-Detektion wurde
der Reaktor zunächst nur mit POD-Beads beschickt. Unter Verwendung von 10 mM
Luminol und 1 mM H2O2 wurden mit dem Enzymreaktor CL-Emissionen beobachtet,
die mit den im POCRE-Chip erzielten Signalhöhen vergleichbar waren. Aufgrund der
größeren zur Verfügung stehen Katalysatormenge führten auch geringere Konzentrationen
als 10 mM Luminol/1 mM H2O2 zu deutlichen Signalen, so daß diese um
den Faktor 10 reduziert wurden. Die Konzentrationsverringerung und Pufferspül-
schritte zwischen den einzelnen Messungen hatten darüber hinaus zur Folge, daß
die immobilisierte POD nicht länger durch die Ablagerung eines braunen Reaktions-
produktes inaktiviert wurde, wodurch das CL-Signal innerhalb von vier Messungen
um etwa 30% absank. Wurde das Peroxid gegen eine Xanthin/XOD-Lösung
ausgetauscht, konnte wie bei einer Beladung des Reaktors mit POD- und XOD-
Beads, keine Emission beobachtet werden. Die ausbleibende Lichtentstehung bei
Einsatz immobilisierter XOD ließ sich mit der herabgesetzten Kopplungseffizienz,
sowie über den vom pH-Optimum abweichenden pH-Wert erklären.
4.4.3 Beurteilung der Eignung mikrofluider Systeme zur Xanthin-Bestimmung
Zusammenfassend kann der Einsatz von Mikrosystemen zur Xanthin-Analytik als
positiv bewertet werden. Trotz der limitierten Zeit, die zur Durchführung dieser
Experimente zur Verfügung stand und daher nur grundlegende Untersuchungen
zuließ, wurden vielversprechende Ergebnisse erzielt. Integrierte mikrofluide Systme
lassen sich auch mit zur direkten Standard-Fluoreszenz-Detektion alternativen
Nachweismethoden nutzten, wobei das Kapillarnetzwerk neben dem eigentlichen
Flüssigkeitstransport eine Vielzahl verschiedener anderer Funktionen (Injizieren,