Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 123
Optik zu realisieren, wurde verzichtet, da durch den Austausch der Linse eine zeitaufwendige
Neu-Justierung des gesamten Systems erforderlich gewesen wäre. Wie
die Voruntersuchungen auch zeigten, konnte die Puffer-Konzentration nicht beliebig
klein gewählt werden. Zur Trennung von Xanthin im POCRE-Chip war eine Mindestkonzentration
von 10 mM nötig, mit geringeren Ionenstärken wurde kein Signal
beobachtet.
Die in Abbildung 56 gezeigte Xanthin-Trennung wurde aus diesen Gründen mit einer
CE-Puffer-Konzentration von 10 mM und einem Fluorescein-Zusatz von 1 µM
durchgeführt. Das Elektropherogramm zeigte einige Abweichungen im Vergleich zu
den Trennungen mit einem konventionellen CE-Instrument, da die Probe nicht wie
zuvor in Wasser, sondern in CE-Puffer (ohne Fluorescein) angesetzt wurde. Da eine
Druckinjektion mit dem Mikrosystem nicht möglich war, wurde die Probe
elektrokinetisch wie unter 2.2.10.3 beschrieben mit Hilfe der doppel-T-Struktur
eingebracht, was einen weiteren Unterschied zum Testablauf am konventionellen
Gerät darstellte. Die anschließende Separation wurde mit einer Spannung von 5,1 kV
durchgeführt, woraus sich eine zu den vorherigen Untersuchungen (0,5 kV/cm)
vergleichbare Feldstärke von 0,52 kV/cm ergab.
Das in Abb. 56 dargestellte Puffer-Elektropherogramm wies im Gegensatz zu den in
Abb. 52 gezeigten Trennungen von in H2O angesetzten Proben nur noch zwei
Signale auf. Aufgrund des geringen allein auf der Gegenwart von Fluorescein im
Elektrolyten beruhenden Leitfähigkeitsunterschiedes wurde unter diesen Bedingungen
kein elektroosmotischer Kohlrausch-Peak beobachtet. Der positive etwa
nach 7 s migrierende Peak war auf die in der Probe enthaltenen Natrium-Ionen zurückzuführen.
Nach der von Kohlrausch definierten Gesetzmäßigkeit kam es zu einer
Anpassung der Leitfähigkeiten zwischen der Na + -Bande und dem Puffer durch die in
diesem enthaltenen Anionen. Auf diese Weise konnte das nicht-fluoreszierende
Natrium durch eine gleichzeitige Fluorescein-Anreicherung indirekt nachgewiesen
werden (indirekter Kohlrausch-Peak). Der große negative Peak resultierte wie schon
unter 3.3.2.2 erläutert aus den Mobilitätsunterschieden der einzelnen Pufferbestandteile
(vacancy peak). Der dritte bei der Analyse von Wasser mit dem kommerziellen
System detektierte negative Peak trat in diesem Elektropherogramm aufgrund eines
identischen pH-Wertes zwischen Probe und Elektrolyt nicht auf.