Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 78
es jedoch – wie zuvor schon erwähnt – nicht möglich die Wechselwirkungen mit den
einzelnen Additiven weiter zu charakterisieren.
Berücksichtigt man bei der Interpretation der Aktivitäts-Daten auch die unter 3.2.1.3
erzielten Ergebnisse, so wird deutlich daß mit Elektrode 5 (XOD/Polylysin-Beschichtung)
die höchsten Ströme gemessen wurden, dieser Sensor aber zugleich
auch die geringste Stabilität aufwies. Der Grund hierfür lag wahrscheinlich in der erhöhten
enzymatischen H2O2-Produktion, die aus der erleichterten Xanthin-Diffusion
resultierte, die aber wiederum zu einer Schädigung der XOD und somit zu einem
schnell einsetzenden Aktivitätsverlust des Enzyms führte. Neben einer veränderten
Xanthin-Diffusion durch die Enzymmembran könnten jedoch auch weitere XOD/
Additiv-Wechselwirkungen oder auch Matrix-Effekte für das Verhalten der einzelnen
Sensoren verantwortlich gewesen sein.
Allgemein waren die entwickelten Platin-Sensoren jedoch mit einer Empfindlichkeit
im Bereich von 50 bis 94 nA/mM nicht geeignet, um die erfahrungsgemäß während
einer Fermentation auftretenden Xanthin-Konzentrationen im Bereich von 5 bis 270
µM bestimmen zu können.
3.2.2 XOD-Graphit-Dickschichtelektroden
Da sich sowohl das Elektrodenmaterial Platin als auch die Immobilisierung der
XOD innerhalb der UV-polymerisierbaren Paste aufgrund der mangelnden Stabilität
als nur eingeschränkt geeignet zur Xanthin-Bestimmung erwiesen hatten, wurde mit
Graphit ein weiteres Elektrodenmaterial getestet, auf das das Enzym in diesem Fall
kovalent über EDC gekoppelt wurde.
3.2.2.1 Untersuchung unspezifischer Signale
Die unter 3.2.1.1 durchgeführten Untersuchungen zur Bestimmung unspezifischer
Signale an Pt-Elektroden, wurden mit einer unbehandelten Graphit-Dickschichtelektrode
wiederholt. Die aus der Injektion von 1 mM H2O2, 1 mM Xanthin
bzw. 1mM Xanthin/5 mM Kaliumhexacyanoferrat resultierenden Ströme sind in
Tabelle 16 zusammengefaßt: