Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 119
so daß durch ein möglicherweise nicht ausreichendes Spülen der Kapillare zwischen
den einzelnen Elektrolytwechseln, Fluorescein verschleppt und so die Xanthin-
Mobilität trotz der nominell geringsten Konzentration verlangsamt wurde.
Da sich die Analysendauer mit ansteigender Fluorescein-Konzentration lediglich um
14 s verlängerte, die Peakhöhen aber einen linearen Anstieg aufwiesen, wurden
weitere Experimente mit einem Fluorophor-Zusatz von 50 µM durchgeführt.
3.3.2.5 Elektrolyt-Konzentration
Neben dem Einfluß der Fluorescein-Konzentration wurde auch die Auswirkung
der Elektrolyt-Ionenstärke auf das indirekte Xanthin-Signal untersucht. Der CE-Puffer
wurde in drei verschiedenen Konzentrationen (2,5 mM, 5 mM und 10 mM) mit jeweils
50 µM Fluorescein angesetzt. In Tabelle 23 sind die Peakhöhen zusammengefaßt,
die durch die Injektion eines Xanthin-Standards (10 mg/l in Wasser) mit dem jeweiligen
Trennmedium erzielt wurden. Das höchste Xanthin-Signal wurde dabei mit
einer Ionenstärke von 5 mM erzielt. Im Vergleich zu den Ergebnissen die mit einem
10 mM CE-Puffer erhalten wurden, bedeutete dies eine Vergrößerung der Peakhöhe
um 78%. Bei einer weiteren Verringerung der Ionenstärke auf 2,5 mM nahm das
Signal zwar wieder ab, blieb jedoch immer noch um 39% gegenüber der 10 mM-
Messung erhöht.
Konzentration CE-Puffer Peakhöhe [mAU]
2,5 mM 3817
5 mM 4881
10 mM 2747
Tab. 23: Einfluß der Elektrolytkonzentration auf das indirekte Xanthin-Signal
Nach Kuhr (1999) kann die Empfindlichkeit einer indirekten LIF-Detektion gesteigert
werden, wenn der Elektrolyt ausschließlich aus dem Fluorophor und seinem Gegenion
besteht. In Abb. 55 sind zwei Elektropherogramme dargestellt, die unter Verwendung
einer 2 µM Fluorescein-Lösung in Wasser als Trennmedium aufgezeichnet
wurden. Um eine maximale und konstante Fluoreszenz-Aktivität zu erhalten, wurde
die Lösung durch Zugabe von NaOH auf einen pH-Wert von 9,2 eingestellt. Das